50T 汉城病毒检测试剂盒（荧光PCR法）

参数规格：
产品名称：汉城病毒检测试剂盒（荧光PCR法）
产品货号：YS-P013961

产品规格：50T

产品分类：PCR检测试剂盒

产品运输：低温运输

产品保存：-20℃保存

产品有效期：一年

产品特点：本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。

实验过程：

一、试剂准备

1. DNA模板

2．公司产品仅用于科研对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶

二、操作步骤

1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。

10×PCR buffer             5μl

dNTP mixl                 4μl

引物1（10pM）               2μl

引物2（10PM）              2μl

Taq酶（2U/μl）            1μl

DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

加ddH2O至               50 μl

视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。

3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

特点优势：

1.   特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过TIANDZ及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。

2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。

3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。

4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。

5.   优势1：序列资源丰富，除TIANDZ公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。

6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。

鸡多巴转运蛋白(DAT)依泽替米贝β-D-葡萄糖苷酸Alexa Fluor 647标记的羊抗鸡IgG

鸡成纤维生长因子6(FGF6) 安普那韦-d4Alexa Fluor 488标记的羊抗鸡IgG

鸡角蛋白19(CK-19/KRT19)  4'-羟华法林FITC标记的兔抗鸡IgG

鸡神经调节蛋白3(NRG-3)6-羟华法林辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡IgG

鸡肾上腺皮质发育异常蛋白(ACD) 7-羟华法林Alexa Fluor 350标记的兔抗鸡IgG

鸡芳香酶(ARO)10-羟华法林(非对映异构体混合物)Alexa Fluor 488标记的兔抗鸡IgG

鸡色素C(Cyt-C)3'-羟华法林辣根过氧化物酶标记的驴抗兔IgG

鸡降钙素(CT) 8-羟华法林FITC标记的驴抗兔IgG

鸡可溶性间粘附分子1(sICAM-1)6-苄氧华法林碱性磷酸酶（AP）标记的驴抗兔IgG

鸡质金属蛋白酶原1(Pro-MMP-1)奥美沙坦酸Cy5标记的驴抗兔IgG

鸡血管生成素样蛋白6(ANGPTL6)  奥美沙坦酯Alexa Fluor 488标记的驴抗兔IgG

鸡GTP酶活化蛋白(GAP)  7,8-二氢-L-生物蝶呤Alexa Fluor 555标记的驴抗兔IgG

鸡质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)生物蝶呤-d3Alexa Fluor 647标记的驴抗兔IgG

鸡蛋白聚糖(PG)(6R)-四氢-L-硫酸生物蝶呤-d3(非对映异构体混合物)PE标记的兔抗狗IgG

鸡乳酸脱氢酶C(LDHC)  (6S)-四氢-L-二硫酸生物蝶呤生物素标记的驴抗兔IgG

鸡多巴受体D4(D4R/DRD4)(6S)-四氢-L-硫酸生物蝶呤生物素标记的羊抗兔IgG
汉城病毒检测试剂盒（荧光PCR法）TIEG1/KLF10/FITC  荧光素标记TGF-β诱导早期应答因1抗体IgGD-2,4-二氨丁酸 99%

RALDH2/FITC  荧光素标记视黄脱氢酶2型抗体IgG3,5-二-L-酪氨酸 BR

RARRES1/TIG1/FITC  荧光素标记视黄酸受体应答蛋白1抗体IgG3,5-二硝-L-酪氨酸 98%

TIGAR humen/FITC  荧光素标记兔抗人TIGAR蛋白抗体IgG酰氨二酸二酯  98%

Rarres2/TIG2/FITC  荧光素标记视黄酸受体应答蛋白2抗体IgG2-羟-3,4-二氢吡喃 97%

Rarres3/TIG3/Chemerin/FITC  荧光素标记视黄酸受体应答蛋白3抗体IgGD-精氨酰 98%

rInsulin /HRP  辣根过氧化物酶标记抗重组人胰岛素抗体IgGDHP HM Resin 0.5~1.1mmol/g, 100~200 mesh, 1% DVB

rInsulin /FITC  荧光素标记抗重组人胰岛素抗体IgG内皮素-1 ≥97.0% (HPLC)
使用方法：

一、样品采集：

1、食品样品：样品的采集与预培养按照样品的采集与预培养按照菌检验要求进行。

2、血液样品：用无菌注射器抽取受检者静脉血2mL，注入无菌EDTA2Na(或柠檬酸钠)抗凝管，立即混匀。

3、粪便样品：取粪便置于灭菌的收集管中送检。

4、病灶部位样品：取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。

一、稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）

1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。

2. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。

3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液（最好用带芯枪头，下同）。

4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

5. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用

6. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。