实验操作步骤：
a．采用认可的方案处死人皮肤成纤维细胞,CCC-HSF-1细胞啮齿动物。
b．立即在无菌超净台内用70％乙醇擦洗整个动物。
c．用无菌的镊子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用无菌镊子将皮肤扯向后腿。
d．用另一无菌的剪刀和镊子切开腹部，取出含有胚胎的子宫，置于无菌的培养皿上。
e．剔除胚胎周围的包膜，将胚胎放于无菌的含有无菌PBS的100ml烧杯中。
f．漂洗胚胎，去掉PBS。继续用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮为止。
公司向您推荐PrimaCell™小鼠肝实质细胞试剂盒说明书的详细说明：
产品名称 | PrimaCell™小鼠肝实质细胞试剂盒说明书 |
规格 | 6次/盒 |
货号 | YS-X6764 |
细胞株的培养和传代培养：
用于检测细胞因子的细胞株通常培养于含10％小牛血清和抗生素的培养液中，培养对细胞因子有依赖性的细胞株时还有加入适量细胞因子。在37℃ 5％ CO2 的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养，根据细胞生长特性，在适当的时候进行传代，一般3～4 天传代一次。
悬浮生长细胞的传代：
直接离心后吸去培养上清液，用新鲜培养液稀释悬浮细胞，一般按1：2-1：5 稀释细胞后，分瓶继续培养。
实验材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml灭菌烧杯2个； 人皮肤成纤维细胞,CCC-HSF-1细胞
3、50ml离心筒2个
4、灭菌培养皿1个，细胞培养瓶1个
5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个
6、细胞计数板1块；
7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把；
8、酒精灯1台；
细胞甘油二脂酰激酶（DAG KINASE）酶连续循环比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格：20次
寡核苷酸探针同位素法DNA斑点杂交*试剂盒 进口/国产 规格：5次
动物源性食品狗源基因检测试剂盒 进口/国产 规格：20次
细胞肌酸激酶同工酶混合型（CK-MB）活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格：20次
石蜡切片组织RUNX3蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 进口/国产 规格：10/20次
植物源性饲料处理试剂盒 进口/国产 规格：20次
组织肌酸激酶同工酶肌肉型（CK-MM）活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格：20次
细胞βAMYLOID蛋白表达比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格：10/50 次
胰蛋白酶（0.25%）四乙酸混合 进口/国产 规格：100毫升
体尿激酶（UROKINASE）活性比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格：20次
细胞CYP2B1蛋白表达荧光定量检测试剂盒 进口/国产 规格：10/50 次
转基因油菜（canola）RF3品系基因检测试剂盒 进口/国产 规格：20次
PrimaCell™小鼠肝实质细胞试剂盒说明书3-溴-2-氯吡分子式：192.44英文名称：3- -2- chloride号：52200-48-3分子量： C5H3BrClN
康乐安分子式：129.54英文名称：Kang Lean号：4214-79-3分子量： C5H4ClNO
7-溴喹啉分子式：208.05英文名称：7- bromide号：4965-36-0分子量： C9H6BrN
2-氯-3-吡分子式：138.55英文名称：2- chloro -3- cyanopyridine号：6602-54-6分子量： C6H3ClN2
3-溴-5-甲-4-吡甲醛分子式：200.03英文名称：3- -5- methyl -4- pyridine formaldehyde号：203569-15-7分子量： C7H6BrNO
马来酰(青鲜素)分子式：112.09英文名称：Maleic hydrazide (MH)号：123-33-1分子量： C4H4N2O2
对甲乙英文名称：The methyl ethyl benzene分子式：120.19分子量： C9H12号：25550-14-5
4-去甲表鬼臼毒素英文名称：4- - demethylepipodophyllotoxin分子式：400.3787分子量：C21H20O8号：6559-91-7
靛质试剂英文名称：Indole reagent分子式：分子量：号：
二安替比林英文名称：Two diantipyryl methane分子式：388.47分子量： C23H24N4O2·H2O； CH号：1251-85-0
甲分子式：46.07英文名称：Methyl hydrazine号：60-34-4分子量： CH6N2
细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。
