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细胞传代:
1. SNU-1411细胞试验准备:200ul/1mlTip 头各一盒(以上物品均需高压灭菌),酒精棉球,废液缸,试管架,微量移液器,记号笔,培养皿,离心管。
2. 弃掉培养皿中的培养基,用 1ml 的 PBS 溶液洗涤两次。
3. 用 Tip 头加入 1ml Trypsin 液,消化 1 分钟(37℃,5%CO2 )。用手轻拍培养瓶壁,观察到细胞从壁上脱落下来为止。
4. 加入 1ml 的含血清培养基终止反应。
5. 用 Tip 头多次吹吸,使细胞分散开。
6. 将培养液装入离心管中,1000rpm 离心 5min。
7. 用培养液重悬细胞,细胞计数后选择 0.8X106 个细胞加入一个 35mm 培养皿。
8. 将合适体积培养液加入离心管中,混匀细胞后轻轻加入培养皿中,使其均匀分布。
9. 将培养皿转入 CO2培养箱中培养,第二天转染。
细胞转染:
1. 转染试剂的准备
① 将 400ul 去核酸酶水加入管中,震荡 10 秒钟,溶解脂状物。
② 震荡后将试剂放在-20 摄氏度保存,使用前还需震荡。
2. 选择合适的混合比例(1:1-1:2/脂质体体积:DNA 质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的 MyoD 或者 EGFP 的 DNA,震荡后在加入合适体积的转染试剂,再次震荡。
磷suan化核有丝分裂器NuMA封闭多肽 | PF-3 小鼠血小板因子3ELISA检测试剂盒 |
阅读障碍相关DLX2封闭多肽 | 人妊娠特异性B(PSPB)ELISA试剂盒 |
DNA修复酶相互作用封闭多肽 | 人血小板生成su受体(C-MPL)自身抗体IgG 检测试剂盒elisa |
ELAVL1封闭多肽 | PrestinELISA试剂盒 |
磷suan化P27封闭多肽/周期su依赖激酶抑制剂封闭多肽 | N-去乙酰化酶/磺基转移酶4ELISA试剂盒 |
9号染色体开放阅读框43封闭多肽 | SaitohinELISA试剂盒 |
EB病毒核抗原1封闭多肽 | RIO激酶2ELISA试剂盒 |
长寿相关基因lASS4封闭多肽 | RAB11家族相互作用3ELISA试剂盒 |
甘露聚糖结合凝集su封闭多肽 | Apelin36(AP36)ELISA试剂盒 |
转化生长因子β1封闭多肽 | 抑丝2(PFN2)ELISA试剂盒 |
DTX1封闭多肽 | |
DNA修复酶相互作用封闭多肽 | SNU-1411细胞抑制suβ-A(INHBA)ELISA试剂盒 |
EGF样3封闭多肽 | AQP-1 大鼠水通道1ELISA检测试剂盒 |
孕激su诱导阻断因子封闭多肽 | apo-B100 牛载脂B100ELISA检测试剂盒 |
障碍自整合BAF封闭多肽 | ParalemminELISA试剂盒 |
细胞培养实验基本操作:
①进无菌室前要洗手,按规定穿隔离衣。开始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和烧灼瓶口。
②操作者动作要轻,安装吸管帽、打开或封闭瓶口等操作应在火焰近处并经过烧灼进行。但要注意,金属器械不能在火焰中长时间烧灼,以防退火;烧过的器械要冷却后才能使用;已吸过培养液的吸管不能再用火焰烧灼,因残留在吸管内的培养液成分如蛋白质等烧焦后会产生有害物质,吸管再用时会将其带到培养液中;胶塞、橡皮乳头及塑料的细胞培养用品过火焰是也不能时间太长,以免烧焦产生有毒气体,危害培养细胞,同时塑料细胞培养用品也会产生变形影响使用。
③使用培养液前不宜过早开瓶,开瓶后的培养液应保持斜位,避免直立,以防止下落细菌的污染。不再使用的培养液应立即封闭瓶口,培养的细胞在处理之前勿过早暴露在空气中。
④操作时尽量不要谈话,咳嗽以防止来自唾沫和呼出的气流所造成的污染。
⑤吸取培养液、细胞悬液时,应专管专用,一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去,以防止污染扩大或造成培养物之间的交叉污染。
⑥操作完毕后应整理好工作台面,用消毒水浸泡的纱布擦拭台面;防止细胞交叉污染:所有从别处转来的或是自己所建的细胞系都要早期留有的充足的冻存储备,一旦怀疑发生交叉污染,可做细胞遗传学方面的鉴定,如发现原有的细胞遗传物发生改变,可以复苏早期冻存的细胞使用。