PrimaCell™大鼠脑膜细胞试剂盒

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

公司向您推荐PrimaCell™大鼠脑膜细胞试剂盒的详细说明：

细胞株的培养和传代培养：
用于检测细胞因子的细胞株通常培养于含10％小牛血清和抗生素的培养液中，培养对细胞因子有依赖性的细胞株时还有加入适量细胞因子。在37℃ 5％ CO2 的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养，根据细胞生长特性，在适当的时候进行传代，一般3～4 天传代一次。
悬浮生长细胞的传代：
直接离心后吸去培养上清液，用新鲜培养液稀释悬浮细胞，一般按1：2-1：5 稀释细胞后，分瓶继续培养。
​
实验操作步骤：
a．采用认可的方案处死人皮肤成纤维细胞,CCC-HSF-1细胞啮齿动物。   
b．立即在无菌超净台内用70％乙醇擦洗整个动物。 
c．用无菌的镊子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用无菌镊子将皮肤扯向后腿。   
d．用另一无菌的剪刀和镊子切开腹部，取出含有胚胎的子宫，置于无菌的培养皿上。   
e．剔除胚胎周围的包膜，将胚胎放于无菌的含有无菌PBS的100ml烧杯中。   
f．漂洗胚胎，去掉PBS。继续用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮为止。
实验材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml灭菌烧杯2个； 人皮肤成纤维细胞,CCC-HSF-1细胞
3、50ml离心筒2个
4、灭菌培养皿1个，细胞培养瓶1个
5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个
6、细胞计数板1块；
7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把；
8、酒精灯1台；

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PrimaCell™大鼠脑膜细胞试剂盒灯盏花乙素英文名称：Flower B分子式：462.37分子量：C21H18O12号：27740-01-8

N-*硅啡啉分子式：159.3英文名称：N- trimethylsilyl morpholine号：13368-42-8分子量： C7H17NOSi

氘代氢锂铝分子式：41.98英文名称：Lithium aluminium hydride号：14128-54-2分子量： AlD4Li

2-吡分子式：94.12英文名称：2- amino pyridine号：504-29-0分子量： C5H6N2； NC5H4NH2

1-溴-4,5-二氯-2-硝分子式：英文名称：1- two -4,5- nitrobenzene号：93361-94-5分子量： C6H2BrCl2NO2

7-氯-4-羟喹啉分子式：179.6英文名称：7- -4- hydroxy group号：86-99-7分子量： C9H6ClNO

4,5-二氯邻二甲腈分子式：197.02英文名称：4,5- two, two号：139152-08-2分子量： C8H2Cl2N2

三尖杉宁碱英文名称：Three - pointed分子式：831.91分子量：C45H53NO14号：71610-00-9

甲磺双氢麦角毒碱英文名称：Dihydroergotoxine methanesulfonate分子式：423.53分子量：C20H29N3O5S号：8067-24-1

硝酸钾分子式：101.1英文名称：Potassium nitrate号：7757-79-1分子量： KNO3

炔诺酮英文名称：Of the分子式：298.42分子量： C20H26O2号：68-22-4