大鼠表皮角质形成细胞

实验操作步骤：  

a．采用认可的方案处死啮齿动物。

b．立即在无菌超净台内用70％乙醇擦洗整个动物。

c．用无菌的镊子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用无菌镊子将皮肤扯向后腿。

d．用另一无菌的剪刀和镊子切开腹部，取出含有胚胎的子宫，置于无菌的培养皿上。

e．剔除胚胎周围的包膜，将胚胎放于无菌的含有无菌PBS的100ml烧杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。继续用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮为止。

产品属性：

产品介绍：

名称    大鼠表皮角质形成细胞

2.组织来源：皮肤组织

3.产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶

4.细胞简介：

大鼠表皮角质形成细胞分离自皮肤组织；表皮位于动物皮肤的外层，由胚胎时期外胚层形成，具有抗摩擦和抗损伤的作用。表皮是皮肤的浅层结构，由复层扁平上皮构成。从基底层到表面可分为五层，即基底层、棘层、颗粒层、透明层和角质层。表皮角质形成细胞是一种能合成角质蛋白的上皮细胞，此类细胞为表皮的主体，由表皮深层始逐渐增殖、分化，并在成为角化的角质细胞中，细胞核与细胞器*消失，细胞亦失去生理功能而脱落。未脱落部分对机体尚有保护作用，故不必在洗擦身体时用力搓擦，使其过早脱失。表皮角质形成细胞主要分布于表皮基底层，在上皮程序性死亡后，细胞产生角化并移向表皮。体外培养的表皮角化细胞容易导致终末分化，不能充分增殖。角质形成细胞最终产生角质蛋白，在其向角质细胞演变过程中，一般可以分为四层，即基底层、棘层、颗粒层以及角质层。有人把前三层或前二层称为生发层或马尔匹基层。此外，在某些部位，特别在掌跖部位，角质层下方还可见到透明层。

5.方法简介：

()实验室分离的大鼠表皮角质形成层细胞先中性消化、后-胶原酶混合消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

6.质量检测：

()实验室分离的大鼠表皮角质形成细胞经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

7.培养信息：

包被条件鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

产品货号CM-R094

换液频率每2-3天换液一次

生长特性贴壁

细胞形态上皮细胞样

传代特性可传1-2代

消化液0.25%

培养条件气相：空气，95%；CO2，5%

处理方法：

收到细胞后，检查外包装是否完整，细胞培养瓶是否完好。如有破损漏液等问题，请即时联系。并进行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25细胞培养瓶外部。

2. 将细胞放入37度培养箱中预温3-4小时后再做处理，以稳定细胞状态。

3. 预热培养基（含10%胎牛血清，1%双抗）。

4. 显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（40×,100×,200×各一张）。

5. ①若细胞密度较小，无菌操作，去掉培养基。每瓶添加第四步中准备的5-6ml培养基。放到37度培养箱培养。待细胞密度达到80%以上，进行传代。

注意事项：

1. 正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。

2. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，

避免开盖时试剂损失。

3. 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

4. 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。

5. 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗

并*清除残留清洁剂。

6. 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

细胞培养的优点：

1.研究的对象是活细胞

在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。

2.研究条件可以人为控制

pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。

3.研究的样本可以达到比较均一性

通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。

4.研究内容便于观察、检测和记录

采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备

记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。

5.研究的范围比较广泛

应用的学科领域较为宽广，如细胞学、免疫学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等；

适用的对象范围广，从低等动物到高等动物，一种动物的不同年龄阶段以及不同组织，都可进行有针对性的研究。

6.研究的费用相对较经济

可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。

Voges-Proskauer(V-P)试剂盒 Voges-Proskauer(V-P) reagent box 5ml*4 0.156-10 ng/mL 人一氧化氮合成(NOS)ELISA试剂盒

250mg 四唑紫 INT(Iodonitrotetrazolium Chloride) 4℃避光保存 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Electron transfer flavoprotein-ubiquinone oxidoreductase, mitochondria

大鼠表皮角质形成细胞Goat Anti-human IgG/PE-Cy7  PE-Cy7标记的羊抗人IgG 规格: 0.1mlMRP8+MRP14  多药耐药相关蛋白8/9/14抗体 规格: 0.2ml

phospho-LKB1 (Thr363)  磷酸化/蛋白激抗体 规格: 0.1ml

Wnt8A  信号通路WNT8A抗体 规格: 0.2ml

D1/C7orf12  第七号染色体开放阅读框12抗体 规格: 0.2ml

CNP/CNPase  C型钠尿肽抗体 规格: 0.1ml

Rabbit Anti-Mink IgG/PE-Cy3  PE-Cy3标记的兔抗水貂IgG 规格: 0.1mlTransketolase(CT)  转酮醇(转羟乙醛)抗体（C端） 规格: 1ml

C19orf21  19号染色体开放阅读框21抗体 规格: 0.2mlAEG-1/LYRIC  AEG-1抗体 0.2ml

50次 柱式细菌DNAout（含） Column Bacterial DNAOUT 常温保存(需要-20℃保存)

500mL Acrylamide: Bis-acrylamide Solution（丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液），29:1   Acrylamide: Bis-acrylamide Solution，29:1   常温保存

Radixin  根蛋白抗体 规格: 0.1ml

1g 牛磺酸脱氧胆酸钠 Taurodeoxycholic Acid Sodium 室温保存

Rabbit Anti-human IgG/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488标记的兔抗人IgG 规格: 0.1ml