具有如下优点:
一、高效、灵敏、特异的抗体;
二、稳定的重复性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;
四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;
五、性价比非常好,节省实验经费。
产品名称:大鼠白介素9(IL-9)elisa试剂盒
英文名称:Rat Interleukin 9,IL-9 ELISA KIT
规格:48T/96T
保存: 2-8℃(频繁使用时);-20℃(长时间不用时)。
有效期: 6 个月(4℃);12 个月(-20℃)。
用途: 用于体外定量分析人血清、血浆、细胞培养上清、细胞裂解液
选择ELISA试剂盒应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、安全性及经济性全面评价。
操作流程如下:
(1)仅用于科研待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
(2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
(12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。
注意事项:
1加样:
①实验样本过多时,可分批次操作,以减少实验时间延长造成的误差;
②加酶试剂后,用吸水纸吸干孔外试剂;
③作定量试验时,使用加样器加注试剂,并经常校正其准确性,此外,要做到一份样本一个移液头,防止交叉污染。
2.温育:
①如有两种温度,尽量使用较低的温育温度、较长反应时间的条件;
②用1个小温度计放置在板孔反应液中测量观察;
③96孔板周围孔与中心孔在温育中的热力学梯度会造成“边缘效应”,因此尽量采用水浴;
3.洗板:
①手工洗板时,拍板时要垂直,避免交叉污染,用力不能过猛,防止抗原抗体复合物脱离;
②洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅,若被杂物堵塞时可用注射器针头挑出;
③为了洗涤效果好,实验室可采用机器与人工洗涤相结合的方法,在机器洗涤后再进行人工洗板1-2次,或适当增加洗板的次数;
4.显色:
ELISA试剂盒中,如以四甲基联苯胺(TMB)为底物,则提供的底物为A和B两瓶应用液;如以邻苯二胺(OPD)为底物,则试剂盒提供邻苯二胺片剂或粉剂。显色反应条件为37℃或室温反应15-30 min。以邻苯二胺(OPD)为底物的试剂,要临用前30 min配制且必须避光。以四甲基联苯胺(TMB)为底物的试剂则不需避光,但A、B液应尽量避免接触金属器械。
5.判定:
读取结果要在15-30 min内完成,定性测定用肉眼判读试验结果时,反应板应水平距离白色背景10-15 cm;定量测定时用酶标仪读取结果,酶标仪不应置于阳光或强光照射下,需先预热15-30 min再进行测试。
试剂配制:
1、酶联板(Assay plate ):一块(96孔或者48孔)。
2、标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
3、样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4、生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6、生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7、辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9、浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10、终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
Wolfram综合征蛋白1(WFS1)(酶联免疫吸附试验法) 98% 豇豆慢生根瘤菌 1g
Wolfram综合征蛋白1(WFS1)(酶联免疫吸附试验法) 98% 酿酒酵母 5g
表面活性物质关联蛋白J(SPJ)(酶联免疫吸附试验法) 98% 蜡状芽孢杆菌 100mg
白介素25(IL25)(酶联免疫吸附试验法) 98% 弗氏志贺氏菌 1g
可溶性半乳糖凝集素3结合蛋白(LGALS3BP)(酶联免疫吸附试验法) 50%水溶液,含0.1 %甲酸稳定剂 美澳型核果褐腐病菌 100g
ⅩⅤ型胶原(COL15)(酶联免疫吸附试验法) 50%水溶液,含0.1 %甲酸稳定剂 藤黄微球菌 500g
细胞外基质蛋白1(ECM1)(酶联免疫吸附试验法) BF3:17.5 - 19.0 % 单核增生李斯特CMCC(B)54002 100ml
封闭蛋白3(CLDN3)(酶联免疫吸附试验法) 95% 绿穗霉 25g
封闭蛋白5(CLDN5)(酶联免疫吸附试验法) 95% 尼氏芽孢杆菌 5g
多胺调节因子1结合蛋白1(PMFBP1)(酶联免疫吸附试验法) 99% 汉逊德巴利酵母fabryi变种 1g
载脂蛋白O(APOO)(酶联免疫吸附试验法) 99% 香菇(泌阳3号) 5g
纤维鞘相互作用蛋白1(FSIP1)(酶联免疫吸附试验法) 98% 球孢白僵菌 100g
连接附着分子3(JAM3)(酶联免疫吸附试验法) 98% 平脐蠕孢菌 25g
连接附着分子1(JAM1)(酶联免疫吸附试验法) 98% 空泡极单胞菌 5g
中间丝蛋白(SYNC)(酶联免疫吸附试验法) 96% 产气肠杆菌(现1) 25g
抵抗素样蛋白β(RETNLβ)(酶联免疫吸附试验法) 96% 布鲁氏菌 5g
毒蕈碱型胆碱受体M2(CHRM2)(酶联免疫吸附试验法) AR,98% 不规则盐海菌 1g
毒蕈碱型胆碱受体M2(CHRM2)(酶联免疫吸附试验法) AR,98% 金针菇(毛柄金钱菌、冬菇) 25g
大鼠白介素9(IL-9)elisa试剂盒体液还原型谷胱甘肽(GSH)浓度比色法定量 IFNAR1(Interferon alpha/beta receptor 1) 20 ul
植物还原型谷胱甘肽(GSH)浓度比色法定量 SH3GL1(Endophilin-A2) 100 ul
细胞氧化型谷胱甘肽(GSSG)浓度比色法定量 IKZF1(DNA-binding protein Ikaros) 20 ul
血液氧化型谷胱甘肽(GSSG)浓度比色法定量 KRT2(KeRatin, type II cytoskeletal 2 epidermal) 100 ul
组织氧化型谷胱甘肽(GSSG)浓度比色法定量 OPTC(Opticin) 20 ul
体液氧化型谷胱甘肽(GSSG)浓度比色法定量 DBH(Dopamine beta-hydroxylase) 100 ul
植物氧化型谷胱甘肽(GSSG)浓度比色法定量 VNN1(Pantetheinase) 20 ul
细胞谷胱甘肽(GLUTATHIONE)总浓度荧光定量 MTDH(Protein LYRIC) 100 ul
血液谷胱甘肽(GLUTATHIONE)总浓度荧光定量 NANOG(Homeobox protein NANOG) 100µl
组织谷胱甘肽(GLUTATHIONE)总浓度荧光定量 MNX1(Motor neuron and pancreas homeobox protein 1) 400 ul
体液谷胱甘肽(GLUTATHIONE)总浓度荧光定量 OTX2(Homeobox protein OTX2) 100 ul
植物谷胱甘肽(GLUTATHIONE)总浓度荧光定量 PIK3CA(Phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha isoform) 100 ul
细胞还原型谷胱甘肽(GSH)浓度荧光定量 S1PR1(Sphingosine 1-phosphate receptor 1) 100 ul
血液还原型谷胱甘肽(GSH)浓度荧光定量 PIK3CD(Phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit delta isoform) 20 ul
组织还原型谷胱甘肽(GSH)浓度荧光定量 GPX2(Glutathione peroxidase 2) 100 ul
体液还原型谷胱甘肽(GSH)浓度荧光定量 AMELX(Amelogenin, X isoform) 100 ul