PrimaCell™人甲状腺癌组织源细胞试剂盒

公司向您推荐PrimaCell™人甲状腺癌组织源细胞试剂盒说明书的详细说明：

细胞株的培养和传代培养：
用于检测细胞因子的细胞株通常培养于含10％小牛血清和抗生素的培养液中，培养对细胞因子有依赖性的细胞株时还有加入适量细胞因子。在37℃ 5％ CO2 的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养，根据细胞生长特性，在适当的时候进行传代，一般3～4 天传代一次。
悬浮生长细胞的传代：
直接离心后吸去培养上清液，用新鲜培养液稀释悬浮细胞，一般按1：2-1：5 稀释细胞后，分瓶继续培养。
​
实验操作步骤：
a．采用认可的方案处死人皮肤成纤维细胞,CCC-HSF-1细胞啮齿动物。   
b．立即在无菌超净台内用70％乙醇擦洗整个动物。 
c．用无菌的镊子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用无菌镊子将皮肤扯向后腿。   
d．用另一无菌的剪刀和镊子切开腹部，取出含有胚胎的子宫，置于无菌的培养皿上。   
e．剔除胚胎周围的包膜，将胚胎放于无菌的含有无菌PBS的100ml烧杯中。   
f．漂洗胚胎，去掉PBS。继续用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮为止。
实验材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml灭菌烧杯2个； 人皮肤成纤维细胞,CCC-HSF-1细胞
3、50ml离心筒2个
4、灭菌培养皿1个，细胞培养瓶1个
5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个
6、细胞计数板1块；
7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把；
8、酒精灯1台；

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PrimaCell™人甲状腺癌组织源细胞试剂盒说明书1-甲-4-(4,4,5,5-四甲-1,3,2-二氧杂戊-2-)-1H-吡唑分子式：208.07英文名称：1甲- 4 -（4,4,5,5 -四甲- 1 -二氧杂戊- 2 -）- 1吡唑号：761446-44-0分子量： C10H17BN2O2

黄华碱英文名称：Huang Huajian分子式：244.3321分子量：C15H20N2O号：486-90-8

3--2-羟吡分子式：110.11英文名称：3- amino -2- hydroxy pyridine号：33630-99-8分子量： C5H6N2O

1-羟-4-丁氧-2,3-二氟分子式：202.2英文名称：1- -4- -2,3- two - hydroxy tetrabutoxy号：136239-68-4分子量： C10H12F2O2

5-氯-8-羟喹啉分子式：179.6英文名称：5- -8- hydroxy group号：130-16-5分子量： C9H6ClNO

异补骨脂二氢黄酮英文名称：Isopsoralenin two flavanones分子式：分子量：号：

5-溴-2,4-二氯嘧分子式：227.87英文名称：5- two chloride号：36082-50-5分子量： C4HBrCl2N2

1-乙酰溴吡分子式：278.15英文名称：1- acetyl phenyl bromide号：16883-69-5分子量： C13H12BrNO

杂油英文名称：Fusel oil分子式：分子量：号：8013-75-0

3-溴-4-氯氟分子式：英文名称：3- bromo -4- chlorofluorobenzene号：7946分子量：

邻菲啰啉分子式：198.22英文名称：Phenanthroline号：5144-89-8分子量： C12H8N2·H2O

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。