细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
产品名称 | 规格 | 货号 |
PrimaCell™人胰腺细胞MatchPair™试剂盒规格 | 6次/盒 | YS-X6869 |
培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.
细胞GRK5激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C) 进口/国产 规格:20次
20 倍 SSC分子生物级浓缩缓冲溶 进口/国产 规格:500毫升
植物叶绿体F型ATP酶(F type ATPase)活性比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
真菌/酵母细胞β-半糖苷酶活性滤膜染色试剂盒 进口/国产 规格:20次
通用型糖类总量铁化物比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
石蜡切片组织RHO 蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 进口/国产 规格:10/20次
组织HSV(HERPES SIMPLX)病毒定性检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
线粒体复合物V蛋白免疫共沉淀分析试剂盒 进口/国产 规格:5次
细胞色素P450亚酶2C18(DICLOFENAC)活性高效相色谱法(HPLC)定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
寡核苷酸探针同位素法RNA北方杂交*试剂盒 进口/国产 规格:5次
品谷氨酸比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
蛋白定量样品预处理试剂 进口/国产 规格:100次
PrimaCell™人胰腺细胞MatchPair™试剂盒规格8-姜酚英文名称:8- ginger phenol分子式:322.44分子量: C19H30O4号:30462-35-2
8-硝喹哪分子式:188.19英文名称:8- nitro group号:881-07-2分子量: C10H8N2O2
2--5-三氟分子式:287.02英文名称:2- amino -5- three f号:97760-97-9分子量: C7H5F3IN
2,6-二氯三氟甲分子式:英文名称:2,6- two CL three号:分子量:
6--2-甲喹啉分子式:158.2英文名称:6- amino -2- methyl group号:65079-19-8分子量: C10H10N2
1,5-萘二磺钠英文名称:1,5- naphthalene two sulfonic acid分子式:332.25334分子量: C10H6Na2O6S2号:1655-29-4
2--3-氟吡分子式:122.1英文名称:2- cyano -3- fluorine pyridine号:97509-75-6分子量: C6H3FN2
1,2-二溴乙分子式:263.96英文名称:1,2- styrene dibromide号:93-52-7分子量: C8H8Br2
1-溴-2-氟-4-三氟甲氧分子式:259英文名称:1- bromine -2- three -4-号:168971-68-4分子量: C7H3BrF4O
2-二膦-2'-(N,N-二甲)联分子式:381.45英文名称:2- two -2'- (N, N- two)号:240417-00-9分子量: C26H24NP
高效唑分子式:291.78英文名称:High effect triazol号:83657-22-1分子量: C15H18ClN3O
培养细胞冻存方案:
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案,必须参阅针对具体细胞的产品说明书。
1.配制冻存培养基,于2°C至8°C下储存,直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时,利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需*培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用 Countess®自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度,计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液,不要搅动细胞沉淀。
注:离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀,将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时,应不时轻轻混合细胞,使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞,使温度每分钟大约降低 1°C。或者,将装有细胞的冻存管放入冻存盒中,然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。