产品特点:
◇高特异性:与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增;
◇高灵敏度:检测灵敏度可达10~100拷贝;
◇操作简便:该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测;
◇高通量:多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。
参数规格:
产品名称:罗斯肉瘤病毒RT-PCR试剂盒
产品分类:荧光定量PCR
货号:CP100980
产品规格:50次
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年储存条件:
14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。
注意事项:
①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
使用方法:
一、稀释标准曲线样品(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。
1. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液,*用带芯枪头,下同)。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照(浓度为 1×10E8 拷贝/μL,试剂盒提供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 用自选方法纯化样品的 DNA,本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8. 如果有 N 个样品,则需要进行 N+2 个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置 qPCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复,则标记 N+9 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),6 个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做 1 次重复,则标记 N+4 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),1 个用于PCR 阳性对照。
五甲氧基红(>98.0%(HPLC))质量规格:>98.0%(HPLC)Pentamethoxy Red Rateosinophilchemotacticfactor,ECFELISA试剂盒大鼠嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)ELISA试剂盒规格:96T/48T 人抗补体1q抗体(ai-C1q-aibody)ELISA试剂盒 ,英文名: ai-C1q-aibody ELISA Kit
苯橙(>95.0%(W))质量规格:>95.0%(W)Benzyl Orange 小鼠白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)ELISA试剂盒 ,英文名: IL1Ra ELISA Kit RatIerleukin-7,IL-7ELISA试剂盒大鼠白介素7(IL-7)ELISA试剂盒规格:96T/48T
3,4,5-三咖啡酰奎宁酸(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品3,4,5-Tricaffeoylquinic acid 大鼠凋亡相关因子(FAS/CD95)ELISA检测试剂盒RatFactor-relatedApoptosis,FASELISAKit 96T/48T HumanGlycogenphosphorylaseBB,GP-BBELISA试剂盒人糖原1酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA试剂盒规格:96T/48T
泽泻醇A醋酸酯质量规格:HPLC≥98%,标准品Alisol A 24-acetate 人s腺苷同型半胱氨酸(SAH)试剂盒 Human S-adenosylhomocysteine,SAH ELISA kit Humankaliureticpeptide,KPELISAKit人利尿肽(KP)ELISA试剂盒规格:96T/48T
叔丁氧羰基-L-天冬氨酸-4-叔丁酯 质量规格:>98%,BRBoc-Asp(OtBu)-OH 英文名称RatPGE1ELISAKit大鼠前列腺素E1(PGE1)规格:96T/48T 人16α羟基雌酮1(16-α OHE-1)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
BOC-D-脯氨酸质量规格:>99%,BRBoc-D-Pro-OH 活体细胞半胱氨酸蛋白酶-9(PASE-9)活性原位荧光染色检测试剂盒20 山羊生长激素释放多肽(GHRP)试剂盒 Goat Growth Hormone Releasing Peptide,GHRP ELISA Kit
BOC-L-丝氨酸甲酯质量规格:BRBoc-Ser-OMe ELISAKitfgl2人纤维介素蛋白规格:48T/96T 尿17羟皮质类(17-OHCS)ELISA试剂盒 ,英文名: 17-OHCS ELISA Kit
N-BOC-O-苄基-L-丝氨酸质量规格:0.98N-BOC-O-Benzyl-L-serine 小鼠肝脂酶(LIPC)ELISA试剂盒 ,英文名: LIPC ELISA Kit RabbitThrombinactivatablefibrinolysisinhibitor,TAFIELISA试剂盒兔纤溶抑制因子/凝血酶激活的纤溶抑制物(TAFI)ELISA试剂盒规格:96T/48T
罗斯肉瘤病毒RT-PCR试剂盒鸡种特异性基因荧光PCR法检测试剂盒
狗种特异性基因荧光PCR法检测试剂盒
猫种特异性基因荧光PCR法检测试剂盒