T25m2 小鼠肾小管平滑肌细胞提取物操作

我公司提供原代细胞、细胞系、细胞株和菌种，细胞库管理规范，提供的细胞株背景清楚，提供参考文献和*培养条件。纯度可达 90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、 HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

小鼠肾小管平滑肌细胞提取物【Mouse Tubular：Normal TubularDerivatives】小鼠肾小管平滑肌细胞提取物是从小鼠原代肾小管平滑肌细胞提取的，小鼠原代肾小管平滑肌细胞从正常小鼠肾小管组织制备。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。

cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。

蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

潜在的应用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。该细胞只可用于科研，不得用于临床应用。
细胞处理：
1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

细胞处理方法：
以下细胞处理方法及细胞说明书仅供参考，具体操作还需要根据到货时细胞密度，细胞生长状态等具体情况，酌情处理，如需要更详细技术指导，请及时电话或邮件联系。
一．贴壁细胞
客户接收到细胞，用75%的酒精消毒（建议配制75%酒精的水是灭菌过的）培养瓶外部。
肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张）。
显微镜观察细胞，当细胞融汇至80%左右（可以传代的情况下），细胞应该在37度培养箱预温1-2h后再做处理。如未达到细胞传代密度，培养瓶应预留一部分培养基继续培养。
严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
1000rpm,5min离心，重悬细胞。换新的细胞培养瓶，37℃,5%CO2  培养。
二．悬浮细胞
1. 接收到细胞，用75%的酒精消毒（建议配制75%酒精的水是灭菌过的）培养瓶外部。
2. 肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张）。
3. 严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4. 将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒）。
5. 1000rpm,5min离心，重悬细胞。 换新的细胞培养瓶和新鲜培养基，37℃,5%CO2  培养细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM，常温条件下离心5分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，吹打均匀后，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO摇匀后进行冻存。
115-51-5  Ambutonium bromide (BL700)  10mg  Theileria equi马泰勒梨形虫(原Babesia equi)LAMP试剂盒 

115-51-5  Ambutonium bromide (BL700)  1mg  Theileria mutans突变泰勒虫LAMP试剂盒 

115-51-5  Ambutonium bromide (BL700)  20mg  Theileria equi马泰勒梨形虫(原Babesia equi)LAMP试剂盒 

115-51-5  Ambutonium bromide (BL700)  5mg  Theileria mutans突变泰勒虫LAMP试剂盒 

115520-21-3  Fmoc-Cys(Trt)-Opfp  25g  Theileria uilenbergi尤氏泰勒虫LAMP试剂盒
HL-02 [L-02,HL-7702], 正常肝上皮细胞 猪肾细胞，LL-PK1细胞 Hs 578Bst(细胞)间羟基肉桂酸(>98%,BR)3-Hydroxycinnamic acid质量规格：>98%,BR

低分化肺腺癌细胞;SK-LU-14,4-二羟基二苯砜(>98%,BR)4,4-Dihydroxydiphenyl sulfone质量规格：>98%,BR

B4GALT1 Others Human  B4GALT1 / GGTB2 细胞裂解液 (阳性对照) 3,3'-二氨基二苯甲酮(>95.0%(GC)(T))3,3'-Diaminobenzophenone质量规格：>95.0%(GC)(T)

恒河猴胚肾细胞;FRhK-4 [FRhK4]3,3'-二硝基二苯甲酮(>99.0%(GC))3,3'-Dinitrobenzophenone质量规格：>99.0%(GC)

LAIR1 Others Mouse 小鼠 LAIR1 细胞裂解液 (阳性对照) 2,4'-二氟二苯甲酮(>95.0%(GC))2,4'-Difluorobenzophenone质量规格：>95.0%(GC)
小鼠肾小管平滑肌细胞提取物操作NEC(食管癌细胞) 5×106cells/瓶×2 NIH/3T3(胚胎成纤维细胞)二硫苏糖醇(DTT)质量规格：>99%,分子生物学级DL-Dithiothreitol

CL-0297Y3-Ag 1.2.3(大鼠骨髓瘤细胞)5×106cells/瓶×2D(+)-二糖质量规格：>98%,BRD(+)-Turanose

CLEC4A3 Others Rat 大鼠 CLEC4A3 细胞裂解液 (阳性对照) D-果糖-1,6-二1酸三钠盐质量规格：>98%,BRD-Fructose 1,6-bisphosphate  salt

少突胶质前体细胞(悬浮生长)总RNAHOPC-os NAD-谷氨酸质量规格：0.98D-Glutamic acid

MDA-MB-436细胞，癌细胞 杂交瘤细胞支原体阳性,B6YH4细胞 神经少突起前质胶质细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)TLCK(进分)质量规格：进分,sigma T7254Nα-Tosyl-L-lysine chloromethyl ketone HCl