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Tris缓冲盐溶液(20×TBS,pH8.0)500ml免费代测

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  • 所在地上海市
  • 更新时间2017-07-10
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  • 入驻年限8
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Tris缓冲盐溶液(20×TBS,pH8.0)500ml免费代测 产品详情

Tris缓冲盐溶液(20×TBS,pH8.0)500ml免费代测注意事项
1)本试剂只适用于实验,不适用于临床检测;
2PIpropidium iodide,碘化丙锭)有毒性,能通过皮肤吸收,对眼睛有刺激作用,使用时需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物质,在操作时请注意避光。在处理和标记时,尽可能在暗处进行。在孵育阶段,用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后,在暗室内用显微镜观察;
4)整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞,尽量在4下操作,以免影响细胞状态。
5)在细胞洗涤的后一步,请尽量将上清弃净,以免PBS残留,有可能会影响实验结果。
6)为防止荧光衰变,宜在1小时内进行流式检测。
7PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,建议首*行Annexin V-FITC染色,短可在上机前5分钟再加入PI染色。
Tris缓冲盐溶液(20×TBS,pH8.0)500ml免费代测实验操作步骤:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量为 1mL ,其他培养器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此类推;对于细胞悬液每50100 万细胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取适量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超纯水的比例稀释JC-1 。剧烈震荡充分溶解并混匀 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色缓冲液(5 ×),混匀后即为 JC-1 染色工作液。
2、阳性对照的设置:
    把试剂盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到细胞培养液中,稀释至10uM ,处理细胞 20 分钟。随后按照下述方法装载 JC-1 ,进行线粒体膜电位的检测。对于大多数细胞,通常10uM CCCP处理 20 分钟后线粒体的膜电位会*丧失,JC-1 染色后观察应呈绿色荧光;而正常的细胞经JC-1 染色后应显示红色荧光。对于特定的细胞,CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相关文献资料决定。
3、对于悬浮细胞:
1)取 1060 万细胞,重悬于 0.5mL 细胞培养液中,细胞培养液中可以含血清和酚红。
2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,颠倒数次混匀。细胞培养箱中 37 孵育20 分钟。
3)在孵育期间,按照每 1mL JC-1 染色缓冲液()加入 4mL 蒸馏水的比例,配制适量的JC-1 染色缓冲液(),并放置于冰浴。
437孵育结束后,600g 4 离心3 4 分钟,沉淀细胞。弃上清,注意尽量不要吸除细胞。
5)用JC-1 染色缓冲液()洗涤 2 次:加入 1mL JC-1 染色缓冲液()重悬细胞,600g 4 离心34 分钟,沉淀细胞,弃上清。再加入 1mL JC-1 染色缓冲液()重悬细胞,600g 4 离心 34 分钟,沉淀细胞,弃上清。
6)再用适量 JC-1 染色缓冲液()重悬后,用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察,也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。
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