电泳级二甲苯蓝 FF 溶液,1%10mL*产品及特点:
尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Urea PAGE)是目前分离 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是单独 配制各种溶液十分繁琐,为此天泽基因开发了本产品。它具有下列特点: 1. 一站式,含有电泳所需要的所有试剂,即开即用,十分方便,免去了 实验人员称取有毒物品。 2. 灵活,可以根据需要配制各种浓度的 Urea-PAGE,以便对长度各异 的 RNA 进行电泳。 3. 电泳后可直接用于 UV 观察、银染、胶回收、Northern 杂交和放射自 显影等。 4. 使用新型缓冲液,可以防止甘油的干扰。
电泳级二甲苯蓝 FF 溶液,1%10mL*使用方法:
一、准备工作
1. 用固相 RNase 清除剂清洁工作的台面和器皿(详见该产品的使用手册)。
2. 配制 1 X 电泳缓冲液 将适量的 10X 电泳缓冲液用 RNase-free 水稀释 10 倍,得到 1X 电泳缓 冲液待用。
3. 配制 10%过硫酸铵溶液 精确称取约 100 mg 过硫酸铵到一干净的 1.5 mL 离心管中,按每 1 mg 过硫酸铵加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水,摇晃致溶, 立即使用。注意:放置时间不要超过一周。
二、配制凝胶
1. 估计所需要的凝胶溶液的体积,一般配制一块 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的胶需要 15 mL 凝胶溶液,配制一块 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的胶 需要 120 mL 凝胶溶液。
2. 新鲜的 40%的丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液的配制:在装有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入约 130 mL 自备的去离子水,然后将全部甲叉双丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液冲洗出来以避免粉末有 毒粉末飘出。甲叉双丙烯酰胺溶解度低,不会溶解在这少量溶液中)。充 分摇晃混匀后所得溶液即 40%的 Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是这样可以在下步留出足够空间加尿素。
3. 根据所需要的凝胶溶液的体积,在一的干净的三角瓶中按下表加入各成分
4. 搅拌并加热到 40-50℃左右,直到尿素*溶解。
5. 冷却到室温后,将三角瓶接上真空系统抽真空处理 10-15 分钟以充分去 除溶液中的氧气(氧气会降低聚合反应效率)。但如果实验条件有限,此 步也可以省略。
6. 边摇晃溶液变加入 50 uL TEMED 和 500 uL 10%过硫酸铵。注意:即 使选择其他工作浓度的 Acrylamide/Bis,TEMED 和 10%过硫酸铵的用 量也不需要随之改变。但如果配置的凝胶溶液的体积变化,TEMED 和 10%过硫酸铵的用量也要按比例改变。
7. 再充分摇晃约 30 秒后迅速灌胶,然后插入样品梳。
8. 室温放置 30-60 分钟使胶凝固。
9. 将凝胶板放置在电泳装置上后,在上下层分别加入适当量的 1X 电泳缓冲 液。如果不马上使用,需要有湿纸将上样孔端盖住以防凝胶过度干燥。
10. 拔出梳子后用加样枪吸取电泳缓冲液,充分将每个加样空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和气泡吹打出来。
电泳级二甲苯蓝 FF 溶液,1%10mL*后续处理:
1. 染色观察:将凝胶一面的玻璃板揭开,直接用仍然附着在另一玻璃板上的 凝胶进行各种染色,包括银染(固定、漂洗、显影和定影等步骤)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL 的 EB 溶液)、天泽基因低毒核 酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液)。 UV 下观察并拍照。
2. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下确定所需要的 miRNA 条带的位置,切胶后进行胶回收处理。
3. Northern 杂交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下确定所需要的 miRNA 条带的位置,切胶后电转移到带正电的尼龙膜上,然后进行杂交处理。
4. 放射自显影:如果 miRNA 样品电泳前经过同位素标记,则将凝胶一面的 玻璃板揭开,用滤纸将附着在另一玻璃板上的凝胶吸附过来,然后包上保 鲜膜,真空抽干,然后使胶跟 X 光片向对置进行放射自显影。
新生牛眼晶体上皮细胞;NBLE
FUCA1 Others Human 人 FUCA1 人细胞裂解液 (阳性对照)
肾上皮细胞Many types of cells包装:5 × 105次方(1ml)
T-CEM细胞,人T细胞白血病细胞 615小鼠肺癌瘤株,HP615细胞 MesenFectagen? 间充质干细胞转染试剂盒
NCI-H596(人肺腺鳞癌细胞) 5×106cells/瓶×2
Ca Ski(人上皮细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0014A-375(人恶性黑色素瘤细胞)5×106cells/瓶×2 小鼠血细胞;WEHI-3 [WEHI3]
CD2 Others Rat 大鼠 CD2 人细胞裂解液 (阳性对照)
人男性正常细胞;Hs68
人输尿管上皮细胞*培养基 100mL
B16BL6细胞,小鼠黑色素瘤细胞 VERO C1008 (E6)(非洲绿猴肾细胞) EB病毒转化的人B淋巴细胞;KM932
CCL15 Protein Human 重组人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 22-113, His 标签)
SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 人细胞裂解液 (阳性对照)
人男性正常细胞;Hs68
CD2 Others Rat 大鼠 CD2 人细胞裂解液 (阳性对照)
人输尿管上皮细胞*培养基 100mL
B16BL6细胞,小鼠黑色素瘤细胞 VERO C1008 (E6)(非洲绿猴肾细胞) EB病毒转化的人B淋巴细胞;KM932
CCL15 Protein Human 重组人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 22-113, His 标签)
SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 人细胞裂解液 (阳性对照)
cFn(Human cellular fibronectin) ELISA kit 人细胞纤维连接蛋白Multi-class antibodies规格: 48T
Anti-X protein (C-Terminus) 抗乙肝病毒X蛋白抗体(C端)Multi-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh HDHD2B/LHPP HDHD2B蛋白抗体 规格 0.2ml
GsaR(Human gastrin receptor) ELISA Kit 人促胃液素受体 96T
Peroxiredoxin 2 英文名称: 硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅱ/巯基抗氧化蛋白抗体 0.1ml
C1orf149 英文名称: 1号染色体开放阅读框149抗体 0.2ml
Anti-X protein (C-Terminus) 抗乙肝病毒X蛋白抗体(C端)Multi-class antibodies规格: 0.2ml
Goat Anti-Chicken IgG/HRP 辣根过氧化物酶标记的羊抗鸡IgG 0.1ml
G gamma7 英文名称: G蛋白偶联受体γ7抗体 0.2ml
抗酪蛋白抗体 anti-bov Casein 1.0ml
Anti-NIT2/FITC 荧光素标记抗NIT2蛋白抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh PPM1G 蛋白质磷酸酶1G抗体(PP2Cγ) 规格 0.2ml
Anti-WIP1/FITC 荧光素标记原癌基因WIP1抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
电泳级二甲苯蓝 FF 溶液,1%10mL*RANTES 小鼠趋化因子Multi-class antibodies规格: 48T
Anti-Phospho-FAK (Tyr407) 磷酸化粘着斑激酶抗体Multi-class antibodies规格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh Mouse IgA 兔抗小鼠IgA抗体 规格 0.2ml
TIMP-1(Human tissue inhibitors of metalloproteinase 1) ELISA Kit 人基质金属蛋白酶抑制因子1 96T
SKI 英文名称: C-SKI抗体 0.1ml
C3orf33 英文名称: 3号染色体开放阅读框33抗体 0.2ml
Anti-Phospho-FAK (Tyr407) 磷酸化粘着斑激酶抗体Multi-class antibodies规格: 0.1ml