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仪表网>产品库>实验仪器>其他实验仪器>其它仪器>* G 钠盐溶液10mL使用说明书
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  • 型号
  • 品牌
  • 所在地上海市
  • 更新时间2017-07-18
  • 厂商性质经销商
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* G 钠盐溶液10mL

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* G 钠盐溶液10mL使用说明书是采用特殊工艺处理得到的大肠杆菌 DH10 Bac 感受态细胞,适用于昆虫杆状病毒 Bac-to-Bac 系统中同源重组的菌株,用于产生重组 Bacmid。使用 pUC19 质粒检测,本产品转化效率可达 107CFU/μg。
* G 钠盐溶液10mL使用说明书 产品详情

* G 钠盐溶液10mL使用说明书产品及特点:
本产品是采用特殊工艺处理得到的大肠杆菌 DH10 Bac 感受态细胞,适用于昆虫杆状病毒 Bac-to-Bac 系统中同源重组的菌株,用于产生重组 Bacmid。使用 pUC19 质粒检测,本产品转化效率可达 107CFU/μg DH10Bac 细胞包含亲本 Bacmid bMON14272 和辅助质粒 pMON7124。亲本 Bacmid 包含一个 mini-F 复制子、*抗性基因、att Tn7 位点和 lac Zα-互补因子。辅助质粒包含 tns ABCD 区域,该区域提供了 mini-Tn7 从供体质粒插入亲本 Bacmid 靶位点所需要的转座蛋白。供体如 pFastBac 系列质粒(pFastBac1pFastBacDual 等)含有 Tn7R Tn7L 同源重组臂,Tn7R Tn7L 之间包含*抗性基因、昆虫病毒多角体基因启动子、多克隆位点和 SV40 病毒的 PolyA 加尾信号。当含有靶基因 pFastBac 的重组质粒转化到 DH10Bac 细胞后,发生重组后就可产生重组 Bacmid,提取纯化重组 Bacmid 转染昆虫细胞 Sf9 Sf21 就可以包装产生昆虫病毒。此外,DH10Bac 细胞中的 The φ80dlacZDM15 基因的产物可以实现β-半乳糖苷酶的α-互补现象,用于重组 bacmid 的蓝白斑筛选。
* G 钠盐溶液10mL使用说明书详细说明书:

* G 钠盐溶液10mL使用说明书规格及成分:

* G 钠盐溶液10mL使用说明书使用方法:
1. 制备含有如下抗生素的 LB 固体平板:50 μ g/mL Kanamycin7 μ g/mL gentamicin10 μg/mL tetracycline100 μg/mL X-gal40 μg/mL IPTG
2. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100 μL,可以根据实际情况分装使用。以下实验以 100 μL 感受态细胞为例。
3. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入 1-10 ng 重组质粒,用移液器轻轻吹打混匀,冰浴 30 分钟。
4. 42热击 90 秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置 2-3 分钟。
5. 每个离心管中加入 900 μL 无菌的 SOC(不含抗生素),混匀后置于 37 摇床, 200rpm 振荡培养 4 小时。
6. SOC 培养基进行 10 倍梯度稀释,如分成 3 个稀释梯度 10-1,10-2,10-3
7. 100 μL 的各个梯度的培养物用于涂布。等平板中的液体*吸收后,倒置平板, 37培养 24-48 小时。 8. 保留剩余的菌液保存于 4,视平板上菌落生长情况决定去留。
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关键词:移液器
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