lNVSc1 感受态细胞 100ul*50-生命科学仪器

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培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
操作方法：
1. 从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。

shēng huà shì jì 2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇 容量： 保存：-20℃ 20次/240ug/支

shēng huà shì jì 28-表高油菜素内酯 容量： 100克

shēng huà shì jì 25cm2正方斜口细胞培养瓶 容量： 100克

shēng huà shì jì 25cm2三角斜口细胞培养瓶 容量： 2～8℃ 25克

shēng huà shì jì 24孔细胞培养板 容量： 500U

shēng huà shì jì 24-表油菜素内酯 容量： 25克

shēng huà shì jì 2216E琼脂 容量： 100克

shēng huà shì jì 20ul吸头 容量： 2～8℃ 1KU

shēng huà shì jì 200ul吸头 容量： 保存：-20℃ 25u

shēng huà shì jì 200ul无菌盒装吸头 容量： 保存：-20℃ 1KU

shēng huà shì jì 200ul盒装吸头 容量： 保存：-20℃ 100U

shēng huà shì jì 200ul盒装无菌带滤芯吸头 容量： 25U

shēng huà shì jì 200ul袋装无菌滤芯吸头 容量： 保存：-20℃ 150ug

shēng huà shì jì 2′-溴脱氧尿苷 容量： 1克

shēng huà shì jì 2′-脱氧胸苷-5′-三磷酸四钠盐 容量： RT 1克

shēng huà shì jì 2′-脱氧胸苷-5′-三磷酸三钠盐 容量： 25克

shēng huà shì jì 2′-脱氧胸苷-5′-二磷酸三钠盐 容量： 5克

shēng huà shì jì 2′-脱氧胸苷-5′-单磷酸二钠盐 容量： RT 1克

shēng huà shì jì 2′-脱氧胸苷 容量： 25克

shēng huà shì jì 2′-脱氧腺苷-5′-三磷酸三钠盐 容量： RT 5克

shēng huà shì jì 2′-脱氧腺苷-5′-三磷酸二钠盐 容量： 1公斤

shēng huà shì jì 2′-脱氧腺苷-5′-二

lNVSc1 感受态细胞 100ul*50 TE-10(人食管癌细胞) 5×106cells/瓶×2

TE-11(人食管癌细胞) 5×106cells/瓶×2

TE671 subline No.2(人横纹肌肉瘤细胞) 5×106cells/瓶×2

TM4(正常小鼠丸Sertoli细胞) 5×106cells/瓶×2

TT(人甲状腺导管癌细胞) 5×106cells/瓶×2

U-118 MG(人脑星形胶质母细胞瘤) 5×106cells/瓶×2

U14(小鼠子细胞) 5×106cells/瓶×2

U14-GFP(小鼠子细胞) 5×106cells/瓶×2

UACC-812(人细胞导管瘤细胞) 5×106cells/瓶×2

UMR-106(大鼠骨肉瘤细胞) 5×106cells/瓶×2

UM-UC-3(人膀胱移行细胞癌) 5×106cells/瓶×2

USMC(大鼠血管平滑肌细胞) 5×106cells/瓶×2

WERI-Rb-1(人视网膜神经胶质瘤细胞) 5×106cells/瓶×2

WI38/VA13(SV-40Z转化肺成纤维细胞) 5×106cells/瓶×2

WPMY-1(人正常前列腺基质永生化细胞) 5×106cells/瓶×2

容量： RT 25克

注意事项:

1. 产品仅用于科研感受态细胞在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少Z终用于涂板的菌量。
操作步骤：
1．取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100        μl感受态细胞能够被1         ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3．42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟
4．每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏
 5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。