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产品名称 | EHA101 感受态细胞 100ul*10 |
包装 | 100ul*10 |
分类 | 根癌农杆菌感受态细胞 |
培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
操作方法:
1. 从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰中并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少15小时。
BLC-1/CXCL13 人B-淋巴细胞趋化因子1 规格: 48T/96T
EHA101 感受态细胞 100ul*10 Bid 人BH3结构域凋亡诱导蛋白 规格: 48T/96T
BAX 人Bcl-2相关X蛋白 规格: 48T/96T
ASP 人A组链球菌菌壁多糖抗体 规格: 48T/96T
AP12 人apelin 12 规格: 48T/96T
AGRP 人Agouti相关蛋白 规格: 48T/96T
AGRP 人Agouti相关蛋白 规格: 48T/96T
8-iso-PG 人8异前列腺素 规格: 48T/96T
8-epi-PGF2α 人8-异构前列腺素F2α 规格: 48T/96T
8-OHdG 人8羟基脱氧鸟苷 规格: 48T/96T
6-keto-PGF1a 人6酮前列腺素F1a 规格: 48T/96T
6-K-PG 人6酮前列腺素 规格: 48T/96T
6-OHDA 人6-羟多巴胺 规格: 48T/96T
5-LO/LOX 人5脂加氧酶 规格: 48T/96T
5-HT 人5羟色胺 规格: 48T/96T
5-HIAA 人5羟基吲哚乙酸 规格: 48T/96T
注意事项:
1. 产品仅用于科研感受态细胞在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少Z终用于涂板的菌量。
操作步骤:
1.取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2.待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
3.42℃热击45秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟
4.每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏
5.根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。