EPI300 感受态细胞 100ul*50-生命科学仪器

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培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
操作方法：
1. 从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。

shēng huà shì jì 无水硫酸钙 容量： 5克

shēng huà shì jì 无水* 容量： 5克

shēng huà shì jì 无水磷酸钠 容量： 500毫克

shēng huà shì jì 无水* 容量： 5克

shēng huà shì jì 无水* 容量： 保存：-20℃ 5克

shēng huà shì jì 无水二氯化锡 容量： 1公斤

shēng huà shì jì 无砷锌粒 容量： 25克

shēng huà shì jì 无菌绵羊血 容量： 100克

shēng huà shì jì 无氨基酵母氮源 容量： 5克

shēng huà shì jì 钨酸银 容量： RT 100克

EPI300 感受态细胞 100ul*50shēng huà shì jì 钨酸钠 容量： 保存：-20℃ 50毫克

shēng huà shì jì 钨酸钾 容量： 500克

shēng huà shì jì 钨酸铵 容量： 保存：-20℃ 1克

shēng huà shì jì 钨酸 容量： RT 25克

shēng huà shì jì 钨粉 容量： 10克

shēng huà shì jì 钨棒 容量： 25克

shēng huà shì jì 乌来糖 容量： RT 25克

shēng huà shì jì 我妻氏培养基基础 容量： RT，避光 200毫升

shēng huà shì jì 蜗牛凝集素 容量： 25克

shēng huà shì jì 蜗牛酶 容量： 5克

shēng huà shì jì *抑制剂 容量： RT 25克

shēng huà shì jì *（猪胃粘膜） 容量： 25克

shēng huà shì jì 胃蛋白胨 容量： 100克

 E-Sel

 MHCⅡ/H-1Ⅱ 大鼠主要组织相容性复合体Ⅱ类 规格： 48T/96T

 MHCⅠ/H-1Ⅰ 大鼠主要组织相容性复合体Ⅰ类 规格： 48T/96T

 MBP 大鼠主要碱性蛋白 规格： 48T/96T

 TSGF 大鼠肿瘤特异生长因子/肿瘤相关因子 规格： 48T/96T

 TRAIL-R4 大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4 规格： 48T/96T

 TRAIL-R3 大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3 规格： 48T/96T

 TRAIL-R1 大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1 规格： 48T/96T

 TNFsR-Ⅱ 大鼠肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ 规格： 48T/96T

 TNFsR-Ⅰ 大鼠肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ 规格： 48T/96T

 TNF-β 大鼠肿瘤坏死因子β 规格： 48T/96T

 TNF-α 大鼠肿瘤坏死因子α 规格： 48T/96T

 NAP-2/CXCL7 大鼠中性粒细胞趋化蛋白2 规格： 48T/96T

 NGAL 大鼠中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 规格： 48T/96T

 NE 大鼠中性粒细胞弹性蛋白酶 规格： 48T/96T

 ACS 大鼠脂酰*合成酶 规格： 48T/96T

 ADP 大鼠脂联素 规格： 48T/96T

 LBP 大鼠脂多糖结合蛋白 规格： 48T/96T

 LPL 大鼠脂蛋白脂酶 规格： 48T/96T

shēng huà shì jì 卫矛醇半固体琼脂 容量： 2～8℃ 100毫升

注意事项:
1. 产品仅用于科研感受态细胞在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少Z终用于涂板的菌量。
操作步骤：
1．取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100        μl感受态细胞能够被1         ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3．42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟
4．每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏
 5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。