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产品名称 | Stbl2 感受态细胞 100ul*10 |
包装 | 100ul*10 |
分类 | 克隆感受态细胞 |
培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
操作方法:
1. 从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰中并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少15小时。
2-氟苯硫酚 2557-78-0
去甲托品酮盐酸盐 25602-68-0
9-苯基-9-芴醇 25603-67-2
2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物 2564-83-2
2-溴乙胺氢盐 2576-47-8
* 25812-30-0
顺式-4-羟基-D-* 2584-71-6
氰基硼钠 25895-60-7
哌啶-1-甲醛 2591-86-8
1-羟基苯并三唑 2592-95-2
Stbl2 感受态细胞 100ul*101-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐 25952-53-8
甲氧甲酰基亚甲基三苯基膦 2605-67-6
5-溴-2-二甲基氨基吡啶 26163-07-5
6-溴-2-吡啶甲酸甲酯 26218-75-7
4-溴丁酸 2623-87-2
D-2-氨基丁酸 2623-91-8
D-2-氨基丁酸 2623-91-8?
N-Boc-L-哌啶-2-羧酸 26250-84-0
S-1-* 2627-86-3
4-吡啶丙醇 2629-72-3
氯铬酸吡啶盐 26299-14-9
L-赖氨酸甲酯盐酸盐 26348-70-9
4-溴-1,2-亚甲二氧基苯 2635-13-4
叠氮磷酸二苯酯 2638
Gzms-B 人颗粒酶B 规格: 48T/96T
Gzms-A 人颗粒酶A 规格: 48T/96T
Cox V-IgM 人柯萨奇病毒IgM 规格: 48T/96T
Cox V-IgG 人柯萨奇病毒IgG 规格: 48T/96T
AHA 人抗组蛋白抗体 规格: 48T/96T
H2A-H2B 人抗组蛋白 规格: 48T/96T
EMAb 人抗子宫内膜抗体 规格: 48T/96T
ATA 人抗滋养膜细胞抗体 规格: 48T/96T
ACA/CENP 人抗着丝点抗体 规格: 48T/96T
ANGA 人抗中性粒细胞颗粒抗体 规格: 48T/96T
ANA 人抗中性粒细胞抗体 规格: 48T/96T
pANCA 人抗中性粒细胞核周抗体 规格: 48T/96T
cANCA 人抗中性粒细胞胞浆抗体 规格: 48T/96T
ACA 人抗中性粒/中心体抗体 规格: 48T/96T
PCNA 人抗增殖细胞核抗原抗体 规格: 48T/96T
Apo A1 人抗载脂蛋白抗体A1 规格: 48T/96T
TAP 人抗原处理相关转运蛋白 规格: 48T/96T
SCL70/topoⅠ 人抗硬皮病抗体70 规格: 48T/96T
HBcAb 人抗乙型肝炎病毒核心抗体 规格: 48T/96T
HBcAb-IgM 人抗乙型肝炎病毒核心IgM抗体 规格: 48T/96T
6-88-9
三氧化硫吡啶 26412-87-3
注意事项:
1. 产品仅用于科研感受态细胞在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少Z终用于涂板的菌量。
操作步骤:
1.取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2.待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
3.42℃热击45秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟
4.每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏
5.根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。