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细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备DMEM-H培养基(DMEM-H:GIBCO,货号12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
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产品名称 | |
规格 | 1×10⁶cells/T25培养瓶 |
货号 | BJ-X96688 |
商品属性：
名称 J774A.1 (小鼠单核巨噬细胞) 别称J-774A.1; J774.A1; J774 A1; J774A.1; J 774A.1; J774 A.1 种属小鼠 年龄（性别）成年 组织来源巨噬细胞 生长特性贴壁细胞，不用消化 细胞形态单核细胞、巨噬细胞样 背景描述J774A.1细胞来源于BABL/cN小鼠，有抗体依赖的吞噬作用，生长受硫酸葡聚糖、PPD和LPS的抑制；J774A.1细胞可产生IL-1β和大量的。 生物安全等级1 生长培养基DMEM＋10% FBS＋1% P/S 推荐传代比例1:3-1:4 推荐换液频率2~3次/周 倍增时间~17小时 冻存条件 冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO 温度：液氮 培养条件 气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃ 受体表达情况Complement (C3), expressed;Fc receptor, IgG, high affinity I (Fcgr1), expressed 注意事项1、该细胞不建议使用消化，会刺激分化； 2、 超过3天不传代细胞容易分化； 3、 培养时，存在少量分化细胞，属于正常现象。 |
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
操作要点：
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
人 ENTPD5 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
食蟹猴 XCL1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
小鼠 CSK / C-Src kinase 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
小鼠 SPG21 / ACP33 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
人 MKK6 / MEK6 / MAP2K6 (207 Ser/Asp, 211 Thr/Asp) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
狗 IL5 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对
J774A.1 (小鼠单核巨噬细胞)50T 军团杆菌PCR检测试剂盒 低温运输，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人/富有剪接因子1(SRSF1)ELISA试剂盒
30次 DNA 修复混合液 DNA Repair Mix -20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Nephrin
1瓶 CL-187[LS180]株 CL-187[LS180] 低温运输和保存
5次 超快核酸转膜试剂盒A（硝酸纤维素膜） Rapid Nucleic Acid Blotting Kit 常温 7.8-500 pg/mL ELISA Kit for Human Prokineticin-1
2 ug pLP VSV-G pLP VSV-G 低温运输，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人膜裂解抑制物(MIRL/CD59)ELISA试剂盒
250mL HPB 5X (High Phosphate Buffer) HPB 5X (High Phosphate Buffer) 常温保存 0.156-10 ng/mL 人卷曲蛋白3(Fz-3)ELISA试剂盒
2 ug pEGFP1- C1 pEGFP1- C1 低温运输，-20℃保存
100次 植物DNAout Plant DNAOUT 常温 1.56-100 ng/mL 人臂板蛋白-4D(SM/SEMA-4D)ELISA试剂盒
李氏增菌肉汤LB2 Listeria Enrichment Broth 10ml*20支/包 1.56-100 ng/mL 人血红蛋白α亚基(Hemoglobin subunit alpha)ELISA试剂盒
1g γ- 球蛋白 ( 牛血 ) γ-Globulins From Bovine Blood -20℃保存大肠杆菌显色培养基进口、国产E.Coli Chromogenic Medium用于快速、准确检测大肠杆菌大肠杆菌培养24小时，显兰色1000ml
10mL Sephacryl S-400基质 Sephacryl S-400 4℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Hornerin
