操作流程
1. 整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作,各区实验服、仪器 、耗材应独立使用,不能混用;实验用吸头采用带滤芯吸头;样本处理区应配有生物安全柜,样本处理在生物安全柜中进行操作;三个区应该配有紫外线杀菌装置。
2. 为避免RNA降解,样本处理过程应在0-4℃条件下操作,且完成实验后立即上机检测;样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
3. 每次实验应该设置阴、阳性对照。
4. 所有试剂在使用应该在常温下充分融化混匀,并应瞬时离心。
5. 试剂盒内所配阴性和阳性对照在一次使用应全部转移至标本准备区,并单独存放。
6. 为防止荧光干扰,应避免裸手直接接触PCR反应管,并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
7. 仪器 扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置;不同批号试剂不能混用。
8. ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正,淬灭基因选择None。
9. 实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称 | 英文名称 | 规格 | 货号 |
同詹姆士城峡谷病毒PCR荧光定量检测试剂盒 | Jerry Slough Virus(JSV,) RTPCR | 多种规格 | BJ-P6905 |
特点:
1. 即开即用,用户只需要提供病毒样品。
2. 根据鲍疱疹样病毒保守序列设计的专一性引物,与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量 PCR 检测,避免后续污染。
5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6. 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
储存条件:-20℃以下,有效期12个月。
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤 1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。 2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。 3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。 | 三、注意事项 1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。设立一个专用的PCR实验室。 2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。 3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。 4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。 5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。 6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。 7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
|
副溶血性弧菌增菌液 Vibrio parahaemolyticus Broth 250g 1.56-100 ng/mL 人内脂素/内脏脂肪素(visfatin)ELISA试剂盒
100mL PEG-TE-LiAc Solution PEG-TE-LiAc Solution 常温保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Leukosialin
2 ug pCAMBIA3301 pCAMBIA3301 低温运输,-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Insulin-degrading enzyme
1 mg Phorbol 12-myristate 13-acetate(PKC激活剂) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human C-C chemokine receptor type 7
50次 植物RNAout Plant RNAOUT 4℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Lysophosphatidic acid receptor 4
PALCAM添加剂1 1ml/支*5
10次 ConA 糖蛋白分离试剂盒 Glycoprotein Isolation Kit (ConA) -20℃保存胰酪胨大豆肉汤进口、国产TSB250克一种通用的微生物营养增菌肉汤,也可用于菌的MPN测定和生产线无菌灌装试验
500mL Lysis Buffer Lysis Buffer 常温保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Malate dehydrogenase, mitochondrial
100g 水解酪素 Casein Enzymatic Hydrolysate 室温干燥保存 0.625-40 ng/mL 人粘蛋白12(MUC12)ELISA试剂盒
酪蛋白葡萄糖琼脂 Sabouraud Dextrose Agar 250g 1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Prostaglandin G/H synthase 2
500mL Imidazole Buffered Saline(咪唑缓冲盐水),5X,pH7.0 Imidazole Buffered Saline,5X,pH7.0 常温保存 0.156-10 ng/mL 人多囊蛋白-1(Polycystin-1)ELISA试剂盒
同詹姆士城峡谷病毒PCR荧光定量检测试剂盒Quercetin PI3K抑制剂(Quercetin) 1mL(10mM)|1g|5g
Daunorubicin Hydrochloride 拓扑异构酶II抑制剂 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg
GSK2656157 PERK抑制剂(GSK2656157) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
Elacridar P-糖蛋白和BCRP抑制剂(Elacridar) 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg
AZD-9291 mesylate EGFR抑制剂(AZD-9291 mesylate) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg
Alda-1 ALDH2激动剂(Alda-1) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
Salubrinal 磷酸酶抑制剂(PP1活性抑制剂)(Salubrinal) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg
AZD2014 mTOR抑制剂(AZD2014) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg
Erdafitinib FGFR家族抑制剂(JNJ-42756493) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
Crenolanib PDGFRα/β和FLT3抑制剂 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
Linsitinib IGF-1R抑制剂(Linsitinib) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg