HotStart Bst4.2 大规格(125ml包装酶)

商品属性：

Bst4.2 DNA/RNA Polymerase 经酶电子重构架和进化筛选（in silico Design & invitro Evolution），其为Bst4.0 的升级品，通用于 DNA 或 RNA 的 LAMP 或RT-LAMP 扩增。
性能提升包括 ：

（1 ）Bst 4.2 全系包含 热启动Aptamer，该配体确保酶在<30℃时，酶活封闭效率>95%,在>60℃时 1min 内释放酶活。该特性利于室温建立反应体系，并大幅降低了低温条件下的非特异扩增；

（2）反应温度提升到 70℃，大幅降低引物 Dimer 的形成，提高扩增特异性，并使得粗样品核酸释放更加充分；

（3）全系包含 Helicaser，因此，允许在不使用 F3/B3 引物的情况下进行 LAMP 扩增（easy LAMP），并允许 FIP/BIP 的引物用量降低一倍。这将进一步降低非特异扩增，并使得扩增均一性大幅提升。

注意： HotStart Bst 4.2 DNA/RNA Polymerase（8U/μl）不含有甘油，可用于冻干体系的建立。
储存：长期保存请置于-20℃以下（12 个月有效）；制品反复冻融 10 次不影响性能，但应避免反复冻融；制品由于含有高浓度的糖组分，-20℃保存的酶制品，在融化时可能会有结晶物，此时在 30℃的温度下融化，过高的温度可能会导致热启动性能下降。一经融化推荐置于 2-8℃保存，在此条件下制品稳定储存 6 个月。
特殊说明：
（1） Bst4.2 DNA/RNA Polymerase 在用于 LAMP 扩增时的推荐反应温度为 65-70℃，最佳反应温度为 70℃。因此其可替代  的 Bst4.0 系列，用于标准 LAMP的扩增。
（2） 由于 反应温度为 70℃，因此在进行eLAMP 扩增时，反应温度为 70℃。
1. 标准 LAMP 扩增
1.1 10xLAMP Primer Mix：FIP/BIP=16 μM each; LF/LB=4
μM each; F3/B3=2 μM each
1.2 配制 LAMP 反应体系
10xBst4.2 Buffer(Mg2+ free) 2.5 μl
100mM Mg2+
1.5 μl
dNTP Mixture（10 mM each） 3 μl
10xLAMP Primer Mix 2.5 μl
HotStart Bst 4.2（8U/μl） 1 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到总体积 25 μl
1.3 反应体系配好后，置于 65-70°C 反应 20~30min。
2. eLAMP 扩增
2.1 10xeLAMP Primer Mix ： FIP/BIP=8 μM each;
LF/LB=4 μM each。
注意：eLAMP（easy LAMP）为去除 F3/B3 引物的方法，为 Bst4.2 系列专用的使用策略，对于大多数引物组，在Helicaser 的加持下，扩增速度几乎不受影响。如引物扩增效率低，可提高 FIP/BIP 浓度到 12~16uM。
2.2 配制 eLAMP 反应体系
10xBst4.2 Buffer(Mg2+ free) 2.5 μl
100mM Mg2+
1.5 μl
dNTP Mixture（10 mM each） 3 μl
10xeLAMP Primer Mix 2.5 μl
HotStart Bst 4.2（8U/μl） 1 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到总体积 25 μl
2.3 eLAMP 的扩增温度为 70°C，反应 20~30min。
其它注意事项
(1) 制品中包含高浓度的盐组分，使用时做好个人防护，防止制品与皮肤、眼、鼻、呼吸道等接触和吸入，一旦接触或吸入，请用大量的清水冲洗。
(2) 防止气溶胶污染，尽可能进行分区操作。

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