寨卡病毒核酸检测试剂盒【储存条件及有效期】
1.避光-20℃储存,有效期 12 个月。
2.低温运输不能超过 4 天;开封后避光-20℃储存,对有效期没有影响。避免反复冻融,冻融 6 次不影响检测效果。
3.生产日期、有效期至:见外包装盒。
【适用仪器】
适用于 ABI 7500、Bio-Rad CFX96、Roche480 等全自动荧光PCR 检测仪。
【样本要求】
1.样本种类:鼻/咽拭子、痰液、支气管肺泡灌洗液;培养物等样品。
2.保存条件:采集的标本应及时送检,24 小时内检测的应 4℃保存,超过 24 小时的最好-70℃保存,并避免反复冻融。
【检测方法】
1 . 试剂准备(试剂准备区)
将试剂盒各组分置 4℃避光融化,充分混匀后瞬间离心。计算试剂使用份数 N(N=样本数+1 管阳性对照+1 管阴性对照),根据下表配置反应体系mix,加入一适当体积离心管中,充分混匀后瞬间离心,按 20μL 分装至 PCR 反应管/板,并转移至样本处理区。
【结果分析条件设定】:
u 基线(Baseline)设定:应选择该次实验指数扩增前所有样本荧光信号比较稳定的一段区域(所有样本荧光信号无较大波动),起始点(Start)应避开荧光采集起始阶段的信号波动,终止点(End)应比最早出现指数扩增的样本Ct值减少1~3个循环,建议基线设为6~15。
u 阈值(Threshold)设定:将阈值线设定在刚好超过正常阴性质控品扩增曲线的最高点。
【质控标准】:
1. 阴性质控品的检测结果应为阴性,无指数扩增期,Ct=40或无Ct;
2. 阳性质控品的检测结果应为阳性,有明显的指数扩增期,Ct值应小于等于35;
3. 以上要求需在一次实验中同时满足,否则该次实验视为无效。
【结果判断】:
1. 阳性:有明显的指数扩增期,且Ct<38;
2.可疑:有明显的指数扩增期,且38≤Ct<40,此时样本为可疑样本;对于可疑样本建议复核一次,若复核结果Ct<40且有指数扩增期,则判定为阳性,否则判定为阴性;
3. 阴性:无指数扩增期,Ct=40或无Ct值均判定为阴性样本。
【注意事项】:
1.PCR 操作各阶段应严格分区操作,避免交叉污染。
2.试剂盒各组分使用前应充分融化混匀,离心数秒后使用。
3.各组分不得与其他产品或不同批号的相应成分进行互换。
4.待测标本若不及时检测,应保存于-20℃或-70℃。
5.样品的处理应该严格按照生物安全规范操作。
6.PCR 操作人员应具有经验和受过专业培训。
7.本试剂盒仅用于科研使用,不做为临床诊断使用。
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