动物组织细胞基因组DNA的提取方法！
动物组织细胞基因组DNA的提取方法！
一、仪器及试剂
⒈仪器：
恒温水浴锅、台式离心机、紫外分光光度计（GeneQuant）、移液器、玻璃匀浆器、离心管（灭菌）、吸头（灭菌）
⒉试剂：
（1）细胞裂解缓冲液：
Tris (pH8.0) 100 mmol/L
EDTA (pH 8.0) 500 mmol/L
NaCL 20 mmol/L
SDS 10%
胰RNA酶 20ug/ml
（2） 蛋白酶K： 称取20mg蛋白酶k溶于1ml灭菌的双蒸水中，?C20℃备用。
（3）TE缓冲液（pH 8.0）：高压灭菌，室温贮存。
（4）酚：异戊醇（25:24:1）
（5）异丙醇、冷无水乙醇、70%乙醇、灭菌水。
二、操作步骤
⒈取新鲜或冰冻动物组织块0.1g（0.5cm3），尽量剪碎。置于玻璃匀浆器中，加入1ml的细胞裂解缓冲液匀浆至不见组织块，转入1.5ml 离心管中，加入蛋白酶K （500ug/ml）20μl，混匀。在65℃恒温水浴锅中水浴30min，也可转入37℃水浴12～24h，间歇振荡离心管数次。于台式离心机以12000 rpm离心5min，取上清液入另一离心管中。
⒉加2倍体积异丙醇，倒转混匀后，可以看见丝状物，用100ul 吸头挑出，凉干，用200ul TE 重新溶解。（可进行PCR反应等，需要进一步纯化的按下列步骤进行）
⒊加等量的酚?异戊醇振荡混匀，离心12000 rpm，5min。
⒋取上层溶液至另一管，加入等体积的异戊醇，振荡混匀，离心12000 rpm，5min。
⒌取上层溶液至另一管，加入1/2体积的7.5mol/L乙酸氨加入2倍体积的无水乙醇，混匀后室温沉淀2min ，离心12000 rpm ,10min。
⒍小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，将附于管壁的残余液滴除掉。
⒎用1ml 70%乙醇洗涤沉淀物1次，离心12000 rpm ， 5min。
⒏小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，将附于管壁的残余液滴除掉，室温干燥。
⒐加200ul TE重新溶解沉淀物，然后置于4℃或?C20℃保存备用。
⒑吸取适量样品于GeneQuant上检测浓度和纯度。
三、常见问题
⒈选择的实验材料要新鲜，处理时间不易过长。
⒉在加入细胞裂解缓冲液前，细胞必须均匀分散，以减少DNA团块形成。
⒊提取的DNA不易溶解：不纯，含杂质较多；加溶解液太少使浓度过大。沉淀物太干燥，也将使溶解变得很困难。
⒋电泳检测时DNA成涂布状：操作不慎；污染核酸酶等。
⒌分光光度分析DNA的A280/A260小于1.8；不纯，含有蛋白质等杂质。在这种情况下，应加入SDS至终浓度为0.5%，并重复步骤2～8。
⒍酚/异戊醇抽提后，其上清液太黏不易吸取：含高浓度的DNA，可加大抽提前缓冲液的量或减少所取组织的量。
北京百欧博伟生物技术有限公司（biobw）是北京的一家专业于生物技术的研究与广泛运用及推广的高科技公司，位于北京企业林立的丰台区造甲街，生物技术推广及运用早于2011年开始，成立公司于2013年一月。本公司主要提供色谱耗材、色谱仪器、固相萃取装置、化学试剂、样品瓶、氘灯、标准品、微生物技术、菌种保藏服务以及ATCC产品代理等产品及服务。
