参数规格:
产品名称:奥尔帕瓦约病毒RT-LAMP试剂盒
英文名称:Arpavayo virus RT-LAMP Kit
货号:GOY-L63212
产品规格:50次
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
储存条件:
仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
实验注意事项:
1)RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;
2)客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号;
3)客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4)样本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类,探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加,非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量(包括定量和相对定量)和定性分析。
主要服务:DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术:引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
阿卡波糖C8H10N4O22,2-二(2-四基)烷
阿卡波糖(标准品)C28H42O7基*氧基硅烷
阿昔洛韦,无环鸟苷C17H14O6正十二烷基二甲基硅烷
阿昔洛韦,无环鸟苷(标准品)C15H22O52--2-氧-1,3,2-二氧杂环戊烷
腺苷;腺嘌呤核苷C24H32O79-双环[3.3.1]壬烷
腺嘌呤核苷(腺苷)(标准品)C14H12O41,二烷
盐酸阿地芬宁C30H50O酸频哪吡咯烷
盐酸阿地芬宁(标准品)C15H10O7黑色素-1
醋酸阿拉瑞林/氨瑞林 C17H24O121--基烷
阿仑酸钠C26H30O81-Boc-甲氨基吡咯烷
阿仑酸钠C17H24O91,2-双*氧基硅基烷
别嘌C11H10O4甲基酰氧基基二甲氧基硅烷
别嘌(标准品)C36H30O161,二噻烷
基雌;雌C40H56O2(3,3,三氟基)二甲基硅烷
基雌(标准品)C21H20O91,5-二基戊烷
前列地尔,前列腺素E1C20H28O41-甲基-1-基溴化吡咯烷
四雌酮,孕素C18H16O8三异基硅烷
四雌酮,孕素(标准品)C20H28O81--氧基烷
奥尔帕瓦约病毒RT-LAMP试剂盒猪GAPDH(3E12) 3-酸甘油脱氢酶单克隆(内参)100 ul
猪胱抑素C(CST3/Cys-C)GAPDH 兔抗3-酸甘油脱氢酶单克隆(内参)100 ug
猪骨形成蛋白2(BMP-2)Beta-Actin β-肌动蛋白(内参)60 ul
猪骨特异性性酸酶B(ALP-B)14-3-3 14-3-3蛋白100 ug
猪骨钙素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)phospho-14-3-3 (Ser58) 酸化14-3-3 α/β/ζ100 ul
猪骨成型蛋白7(BMP7)14-3-3 family proin 苹果14-3-3蛋白(植物)100 ug
猪谷氨酰合成酶(GS)2,4-D 2,4-二氧酸(除草剂)100 ug
猪睾酮(T)2,4-D 2,4-二氧酸(除草剂)单克隆100 ug
猪高铁血红蛋白(MHB)4EBP1 eIF4E结合蛋白100 ul
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。