蛋白组学分析，是蛋白质分析的一项非常重要的技术，一般会使用ESI-LCMS或者MALDI-TOFMS。许多蛋白质和肽极其微量，需要质谱仪的高灵敏度检测才能发现，而这就需要一个非常稳定的前端HPLC支持此微量检测。
Prominence nano系列是一套纳升LC系统，可在纳升流量下进行准确流速的溶剂输送。按照应用不同，可以配置成1D和2D系统。
Prominence nano具备纳升流速下的高保留时间重复性，非常低的系统死体积和很低的交叉污染等特点。
基本性能
· 纳升流速传感器可保证准确的纳升溶剂传输
· RFC系统大大降低溶剂消耗
· 低容量纳升阀---保证了低的系统死体积
· 高灵敏度分析
纳米辅助控制软件的直观操作
· 图形界面直观操作
· 可视化监控仪器运行状态
· 二维参数的便捷设置
蛋白质组分析的应用
· 高保留时间重复性
· 二维LC的高分辨率
纳升流速传感器可保证准确的纳升溶剂传输
LC-20AD nano采用了新的RFC技术,可对每一个泵进行独立的流速控制，在纳升流速下保证好的流量精度。RFC系统是由高精度的纳升流速感应器控制，确保在任何时间准确的流速测量。同时，流量传感器配置了准确的温度控制机制，以较大程度减少不确定的环境因素对溶剂输送的影响。LC-20AD nano在梯度分析能保证很好的流速稳定性，在300nL/min时候保留时间重复性的RSD小于0.2%。
RFC系统的原理
泵内配置了一个流速传感器，可持续监测泵输出的纳升流速。为了保证流速在设定的范围内，采用反馈控制模式，传感器的监测到真实流速后可以自动调整分流比例，从而保证流速的准确性。另外，分流后的流动相在混合前就经过回流管路回到溶剂瓶，不会浪费溶液。
低溶剂消耗
RFC系统可确保每个泵输出的溶剂分流后又回到流动相瓶中。就算在高压梯度分析中，两种溶剂在分离后并不会像废弃物一样排出，从而降低溶剂消耗并减少对环境的影响。
FCV纳升阀，低死体积
FCV nano
FCV纳升阀体积为25nL，在纳升范围内几乎不会展宽。在纳升LC使用捕集柱进样和二维系统中，FCV 纳升阀是*的。FCV 纳升阀通过使用强化的定子和聚醚醚酮的转子，可以大大降低样品的吸附，同时获得很好的耐用性。
高灵敏度分析
SIL-20AC
SIL-20AC的直接进样功能与FCV纳升阀的低扩射性能相结合可实现微量体积样品的进样分析。FCV纳升阀后连接的捕集柱可以对进样的样品进行捕集浓缩，从而实现高灵敏度分析。而且，SIL-20AC被*为交叉污染较低的自动进样器，这些特征都可以满足高灵敏度MS分析的要求。
2维LC的辅助控制软件
辅助控制软件可对2维LC进行便捷设置，在软件图形界面上可轻松对2维HPLC的进行复杂梯度编程，设定流速等，然后生成方法文件并下载至仪器中进行控制，而图形化的流路图和梯度曲线代表当前状态。简便的设置可避免单独使用LC控制软件带来的一系列的操作问题。
Prominence nano 2D系统在线的结合了离子交换和反向色谱模式（如下图所示），每种色谱模式都独立运行，两种模式的结合可进行有效的分离。Prominence nano 2D系统可与配备Nano ESI源的LCMS系统联用进行湿法蛋白组学分析，也可以与点靶仪和MALDI-TOF质谱联用进行干法蛋白组学分析。
易操作的一维体系
Nano-Assist一维LC设置图
1D 纳升LC系统对于确认SDS PAGE分离前的蛋白质十分有效，1D系统只需要非常简单的操作就可以实现。当然，辅助控制软件在1D和2D系统中使用都是十分方便的。
高保留时间重复性
蛋白质组分析需要比较不同样本的色谱峰差异，而样本中又存在许多特征相似的多肽，对保留时间的重复性要求非常高。Prominence nano系统的高重复性可保证蛋白质组分析的高精数据，配置了RFC系统的LC-20AD nano可以在流速为300 nL/min获得RSD不超过0.2% 的保留时间重复性。
牛血清白蛋白（BSA）酶解样品的重复性
2维 LC的高分辨率
牛血清白蛋白（BSA）酶解样品的重复性
在蛋白质组学分析时，单一的1D反相分离不足以提供足够的色谱峰容量；所以，为了实现复杂样品的分离，需要进行2D分离以保证足够的峰容量。Prominence nano系统可以进行2D分析，结合阳离子交换和反相模式，为蛋白质组学分析提供所需的核心技术。下图为200fmol酵母蛋白质的分析图，1D分离中的未分离组分在2D中继续分离成几个组分，2D分离的峰容量大大大于1D所获得的效果。
分析条件
一维
柱 | PolysulfoethylA (50mmL.×1mmI.D.) |
流动相 | 甲酸铵缓冲液 |
流速 | 40 nL/min |
捕集柱 | (5 mmL.×300 m I.D.) |
捕集时长 | 5分钟 |
脱盐溶剂 | 水/蚁酸=100/0.1 |
脱盐流速 | L/min |
脱盐时长 | 5分钟 |
2维
柱 | PicoFrit (100 mmL.×75 m I.D.) |
流动相 | 梯度洗脱 |
流速 | 600nL/min |
温度 | 温度 |
检测 | LCMS-IT-TOF |
样本 | 酵母蛋白中的蛋白 |
* 分别利用1维和2维中不同类型的柱体进行其他组合的分离模式也是可行的。在这种情况下，分离或检测方法由于使用的移动相分离模式或类型之间的相互作用，可能会有一些限制。
连接MALDI-TOFMS使用
Prominence nano系统不仅仅可以通过nano ESI接口连接LCMS使用，还可连接到配有自动点靶仪的MALDI-TOFMS仪器。为了准确分析MALDI靶的每个色谱峰，需要LC能够在1nL到1µL范围之内准确控制流速，Prominence nano系统的*了此需要。
酶解BSA样品的UV色谱图（500fmol）
分析条件
检测器 | UV220 nm |
柱 | MonoCap for Fast-flow 快速MonoCap |
流动相 | 1、水/乙腈/蚁酸=98/2/0.1(v/v) B) 水/乙腈/蚁酸=5/95/0.1(v/v) |
流速 | 1 µL/min |
温度 | 环境温度 |
捕捉柱 | ODS (1 mmL. × 0.5 mm I.D.) |
点靶间隔 | 12 秒的点断 |
