天根试剂盒-高效植物基因组​ ​2

天根试剂盒- 高效植物基因组

产品介绍

天根试剂盒-高效植物基因组 采用可以DNA的离心吸附柱自配的裂解缓冲液系统，能够高效提取多种不同植物组织中的基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司新型材料， 高效吸附DNA，可有效去除杂质蛋白。配套的裂解缓冲液可以高效裂解植物细胞，保护DNA的完整性，提高基因组DNA浓度。提取的基因组DNA片段大，纯度得率高，质量稳定可靠。

使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、 Southern等实验。

储存条件

 试剂置于室温（15-30℃）干燥条件下可保存12个月；更长时间的保存可置于2-8℃。

使用中若产生沉淀，使用前应先将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间，必要 时可在37℃水浴中预热10 min，以溶解沉淀。

 产品特点

• 简单快速：1 h内即可获得高质量的基因组DNA。
•  广 泛：适用于各种植物组织。
•  高 纯 度：获得的DNA可直接用于PCR、酶切、杂交等分子生物学实验。

请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。

 1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。

 2．缓冲液FGA可能发黄，并不影响提取效果。

 3．若缓冲液FGA或LP2有沉淀析出，可在37℃水浴溶解，摇匀后使用。

 4．所有离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。

天根试剂盒-高效植物基因组说明书

使用前请先在缓冲液LP3和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。 

1. 处理材料： 取植物新鲜组织100 mg或干重组织20 mg，加入液氮充分碾磨。加入400 μl缓冲液FGA和 6 μl RNase A（10 mg/ml），旋涡振荡1 min，室温放置10 min。

 2. 加入130 μl缓冲液LP2，充分混匀，旋涡振荡1 min。

 3. 12,000 rpm（~13,400×g）离心5 min，将上清移至新的离心管中。

 4. 加入1.5倍体积的缓冲液LP3(例如500 μl的滤液加750 μl缓冲液LP3) (使用前请先检查是否 已加入无水乙醇)，立即充分振荡混匀15 sec，此时可能会出现絮状沉淀。

 5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中）， 12,000 rpm（~13,400×g）离心30 sec，倒掉废液，吸附柱CB3放入收集管中。

 6. 向吸附柱CB3中加入600 μl 漂洗液PW (使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12,000 rpm(~13,400×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。 

注意：如果吸附柱膜呈现绿色，向吸附柱CB3中加入500 μl无水乙醇，12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。

7. 重复操作步骤6.

 8. 将吸附柱CB3放回收集管中，12,000 rpm (~13,400×g) 离心2 min，倒掉废液。将吸附柱 CB3置于室温放置数分钟，以晾干吸附材料中残余的漂洗液。 

注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续 的酶反应(酶切、PCR等)实验。

9. 将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 μl洗脱缓 冲液TB，室温放置2-5 min，12,000 rpm（~13,400×g）离心2 min，将溶液收集到离心 管中。 注意：为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中,室温放置2 min，12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min。洗脱缓冲液体积不应少于50 μl，体积过小 影响回收效率。

洗脱液的pH值对于洗脱效率有较大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其 pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防 DNA降解。 

DNA浓度及纯度检测 得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。

回收 得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。 

DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA、40 μg/ml 单链DNA。

 OD260/OD280比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏 低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。