TRzol（总 RNA 提取试剂）

                                                                    TRzol（总 RNA 提取试剂）
商品属性：

商品介绍：

储存条件：

TRzol 在室温下能稳定保存 12 个月。尽管如此，为达到最佳效果，我们建议保存 在 2-8℃的环境下。

重要提示：

有毒物接触皮肤或者不慎吞服，会导致灼伤。一旦接触皮肤后立即以大量的洗涤 剂和清水清洗。若感不适，看医生并寻求和其他成分的正确治疗方案。

产品介绍：

TRzol试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂。它在破碎和裂解细胞时能保 持RNA的完整性。加入氯仿后离心，样品分成水样层、中间层和有机层。RNA存在于 水样层中。收集上面的的水样层后，RNA可以通过异丙醇沉淀来回收。 无论是人、动物、植物还是细菌，该方法对少量及大量的组织和细胞均有较好的 分离效果。TRzol 试剂操作上的简单性允许同时处理多个样品。所有的操作可以在一 小时内完成。TRzol 抽提的总 RNA 能够避免 DNA 和蛋白的污染，可用于 RNA 印迹分 析、斑点杂交、poly(A)+筛选、体外翻译、RNA 酶保护分析和分子克隆。如果是用于 PCR，当两条引物位于单一外显子内时，建议用扩增级的 DNase I 来处理抽提的总 RNA。

TRzol试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如，从大鼠肝脏 抽提的RNA经琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色，可见许多介于7kb和15kb之间不连续 的高分子量条带(mRNA和hnRNA成分)，两条优势核糖体的分子量约在5 kb (28S)和2

kb(18S)，低分子量RNA介于0.1和0.3kb之间 (tRNA, 5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8。

注意事项：

1.从少量的组织(1~10mg)或细胞(102-104 个)中分离 RNA 样品：往组织或细胞中加入 800µl TRzol。待样品裂解后，加入氯仿并进行步骤 2 中的抽提操作。在用异丙醇沉淀 RNA 之前，加入 5~10μg 无 RNA 酶的 glycogen 作为水样层的载体。为降低其黏度在加入氯仿前用 26 号注射器抽吸两次以切断基因组 DNA。Glycogen 会留在水样层中并和 RNA 共析出。在浓缩到4mg/ml 之前它不会抑制逆转录反应第一链的合成也不会抑制 PCR。

2.在匀浆化后和加入氯仿之前，样品可以在-60℃或者-70℃保存至少一个月。将RNA 沉淀溶于 75%的乙醇在 2-8℃至少可以保存一周，在-5—-20℃下至少可保存一年。

3.用 TRzol 抽提 RNA 时要戴手套和护眼罩。避免接触皮肤和衣服。在化学通风橱完成操作。避免呼吸道吸入。如无例外，室温保持在 15~30℃的条件下。

自备试剂：

氯仿、异丙醇、75%乙醇(RNase-Free water 配制)、RNase-Free water（将水加入无RNA 酶的玻璃瓶中，加入 DEPC 至 0.1% (V/V)。放置过夜并高压灭菌）。0.5% SDS溶液(RNase-Free water 配制)（可选）。

操作步骤：

1.样品预处理

a. 植物组织：以叶片 RNA 提取为例。取新鲜叶片在液氮中充分研磨或将叶片剪碎后直接在 TRzol 试剂中研磨，研磨要迅速，最好不要超过 1min。大约 100mg 叶片使用 1ml TRzol 试剂。

b. 动物组织：以鼠肝脏 RNA 提取为例。取新鲜或-70℃冻存组织，每 30-50mg 组织加入 1ml TRzol 试剂，用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积一般不要超过 TRzol 试剂体积的 10%。

c.单层生长的细胞：直接往直径3.5 cm的培养板中加入1ml的TRzol裂解细胞，通过移液管分次移出细胞裂解物。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的TRzol量（每10cm2加1ml）。当TRzol量不足时可导致抽提的RNA中污染有DNA。

d.悬浮生长的细胞：通过离心来沉淀细胞。在TRzol试剂中用移液管反复吹打来裂解细胞。每5~10×10

6的动物细胞，植物或酵母菌细胞或每1×10

7细菌加1ml的TRzol。在加入TRzol前应避免洗涤细胞，因为那样会增加mRNA降解的可能性。破裂某些酵母菌和细菌可能需要使用匀浆器。

2.分离阶段 将匀浆样品在15 -30°C条件下孵育5 min以使核蛋白体分解。（可选步骤：4℃ 12,000rpm(~13,400×g) 离心10min，取上清。 注意：如果样品中含有较多蛋白、脂肪、 多糖或肌肉、植物结节部分等，可离心去除。 离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、 高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织样品时，上层是大量油脂，应除去。 取澄清的匀浆溶液进行下一步操作。）每1ml TRzol加0.2ml氯仿。盖紧样品管盖，用手 用力摇晃试管15秒并将其在室温下孵育2-3 min。4℃ 12,000rpm(~13,400×g)离心15 min。 离心后混合物分成三层：下层氯仿层，中间层，上层无色的水样层。RNA存在于 上层水样层当中。水样层的容量大约为所加TRzol容量的60%。

3.RNA 的沉淀 将水样层转移到新的离心管中，如果希望分离DNA和蛋白，有机层和中间层同样 要予以保留。通过将水样层和异丙醇混合来沉淀RNA。每1ml TRzol加入0.5ml异丙醇， 混匀。将混合的样品在15 -30°C条件下孵育10min，4℃ 12,000rpm(~13,400×g)离心15 min。RNA沉淀在离心前通常不可见，离心后形成一胶状片状沉淀附着于试管壁和管底。

4.RNA 的漂洗

移去上层悬液。用75%的乙醇(RNase-Free water配制)洗涤RNA沉淀1-2次，每1ml 的TRzol至少加1ml的75%乙醇。旋涡振荡混合样品并在2~8°℃下以不超过7,500×g的离 心力高速冷冻离心5 min。

5.RNA 的再溶解 室温简单干燥RNA沉淀，不要在真空管里离心干燥RNA。尤为重要的是，不能让 RNA沉淀干燥那样会极大地降低它的可溶性。部分溶解的RNA样品其OD260/OD280 比值<1.6。用移液管分几次移取RNase-Free water或0.5%SDS溶(RNase-Free water配制) 来溶解RNA（如果RNA以后要用于酶切反应时，避免使用SDS。）RNA还能被100%甲 酰胺（除去离子）再溶解并保存在-70°C。

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