原代人角膜内皮细胞

原代人角膜内皮细胞

包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%yi蛋白酶

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

方法简介：

公司实验室分离的人角膜内皮采用混合胶原酶消化结合内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测：

公司实验室分离的人角膜内皮经NSE（神经元特异性烯醇化酶）免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

1. 组织块培养法

组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶（或皿）中，瓶壁可预先涂以胶原薄层，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞能沿瓶壁向外生长。

2. 消化培养法

组织消化法是把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和 非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状 变成 絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠 瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。

3. 悬浮细胞培养法

对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。

4. 器官培养

器官培养是指从供体取得器官或组织块后，不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养，器官培养可保持器官组织的相对完整性，可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响，以及局部环境的生物调节作用。

1. 取材的组织要尽快培养。如若不能及时培养，可将组织浸泡于培养液内，放置于冰浴或4℃冰箱中，如果组织块很大，应切成1cm3以下的小块再低温保存，但时间不能超过24h。

2. 从消化道、周围有坏死组织等污染因素存在的区域取材，可用含500～1000u/ml的青BSS液漂洗5～10min，或用10%注射液冲洗浸泡10min再作培养。

3. 组织块不易贴壁，可预先在瓶壁涂薄层血清、胎汁或鼠尾胶原等。

4. 原代培养的1～2d内要特别注意观察是否有细菌、真菌、霉菌的污染，一旦发现，要及时清除。