人Toll样受体9elisa试剂盒

人Toll样受体9elisa试剂盒试验所需自备物品:

1.  酶标仪(450nm波长滤光片)

2.  高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μl, 2-20μl, 20-200μl, 200-1000μl

3.  37℃恒温箱, 双蒸水或去离子水

4.  吸水纸

检测前准备工作:

1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶*溶解后再配制洗涤液。(加热温度不要超过50℃)使用时洗涤液应为室温。

3.  标准品: 加入标准品&标本稀释液1.0ml至冻干标准品中，静置10分钟，待其充分溶解后，轻轻混匀(浓度为5000 pg/ml)。然后根据需要进行倍比稀释(注：不要直接在板中进行倍比稀释)。建议配制成以下浓度： 2500、1250、625、312.5、156.2、78.1、39.05、0 pg/ml。样品稀释液直接作为空白孔 0 pg/ml。如配制2500pg/ml标准品：取0.5ml (不要少于0.5ml )5000pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

4. *化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量(以100μl/孔计)，实际配制时应多配制100-200μl。使用前15分钟，以*化抗体稀释液稀释浓缩*化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。

5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量(以100μl/孔计)，实际配制时应多配制  100-200μl。使用前15分钟，以*化抗体稀释液稀释浓缩*化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。

人Toll样受体9elisa试剂盒本处理及要求：

1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

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