大鼠碱性磷酸酶（ALP）elisa试剂盒

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大鼠碱性磷酸酶(ALP)elisa试剂盒实验原理：

本试剂盒采用双位点夹心酶联免疫吸附法（ELISA），测定样品中大鼠*腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）的水平。向预先包被大鼠*腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）抗体的酶标孔中加入标准品、待测样本和HRP标记的大鼠*腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）抗体，经过温育和洗涤，去除未结合的组分，然后再加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅与样品中大鼠*腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）的浓度呈正相关。

大鼠碱性磷酸酶(ALP)elisa试剂盒ELISA操作常见问题：

1．边缘效应 使用96孔板的ELISA测定中，常发现有“边缘效应"，即外周孔显色较中心孔深。经研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体，在实验室的常规ELISA测定中，将板从室温（通常在25℃左右）置于37℃温箱，板也升温时，在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度（如37℃），就可以很容易地排除“边缘效应"，并且可提高测定的重复性。

2．加样 在现在的ELISA商品试剂盒中，必然有使用微量加样器加入样本的步骤。注意的关键点是：加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。所以，有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性，下次测定为阴性，往往就是上述加样及试剂的错误所致。

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