《荧光定量聚合酶链反应分析仪校准规范》征求意见

　　【仪表网 仪表标准】5月6日，贵州省市场监督管理局发布了《荧光定量聚合酶链反应分析仪校准规范》征求意见稿，现开始公开征求意见。
 

　　2020年随着新型冠病毒在全球的快速传播和高感染率，如何快速、高效的确诊新冠病毒患者显得尤为重要，实时荧光定量PCR仪因其时间短、成本低等特点，已成为目前应用最广泛的新冠肺炎确诊方法之一。实时荧光定量PCR仪用于精确检测新型冠状病毒在患者体内存在的数量、是否复制、是否传染、传染性有多强、是否必要服药、肝功能有否异常改变能及时判断病人最适合使用哪类抗病毒药物、判断药物疗效如何、给临床治疗提供了可靠的检验依据。
 

　　实时荧光定量PCR仪(real-time quantitative PCR，RQ-PCR)是在聚合酶链式反应技术(Polymerase Chain Reaction，PCR)的基础上研发出来的新技术，所谓real-time quantitative PCR技术，是一种新的核酸定量技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基因，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。荧光定量可以实现精确定量，普通PCR则不行。荧光定量体现可以看到整个扩增过程，可以看到扩增效率，溶解温度，直接得到的标准曲线等，这些是普通PCR无法实现的。实时荧光定量PCR分析仪主要通过仪器内部热循系统的升降温变化，使得DNA或RNA片段得以复制扩增，仪器光学系统采集伴随DNA或RNA扩增产生的荧光信号，并对荧光信号进行分析转化、数学运算后，得到扩增和熔解曲线。具体数据就是实时荧光定量PCR仪的重要参数Ct值(Ct value)、阈值(threshold)和基线(baseline)。通常，第3-15个循环的荧光值就是基线，是由于测量的偶然误差引起的。阈值一般是基线的标准偏差的10倍。在实际操作中也可以手动调节，位于指数期就可以。Ct值就是荧光值达到阈值时候的PCR循环次数。所以是一个没有单位的参数。
 

　　在荧光信号定量部分，由于Ct值直接关系定量准确度，对于实时荧光定量PCR分析仪来说，Ct值是实时荧光定量PCR分析仪光学系统主要的校准参数。除此之外，还要进行荧光强度检测重复性和荧光线性相关性的校准。
 

　　根据黔市监办函〔2020〕603号文件下达的“ 荧光定量聚合酶链反应分析仪校准规范”制定任务，制定出适合贵州省医用麻醉机的地方计量校准规范，满足贵州省计量工作的需要，使荧光定量聚合酶链反应分析仪计量性能准确可靠，测量结果具有溯源性，进而为正确诊断提供计量保障，为荧光定量聚合酶链反应分析仪的质量监督、校准、质控安全等提供技术依据。
 

　　本规范依据JJF 1071-2010《国家计量校准规范编写规则》和JJF 1001-2011《通用计量术语及定义》的要求编写，依据JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》给出了校准结果测量不确定度及评定示例。校准方法及计量特性等主要参考了JJF 1527-2015《聚合酶链反应分析仪校准规范》、YY/T 1173-2010《聚合酶链反应分析仪》、JJF1101-2019 《环境试验设备温度、湿度参数校准规范》。
 

　　依据JJF 1071-2010《国家计量校准规范编写规则》，本规范内容包括范围、引用文件、概述、计量特性、校准条件、校准项目、校准方法、校准结果的表达等内容。
 

　　本规范为首次发布。本规范适用于荧光定量聚合酶链反应分析仪的校准，其他类型聚合酶链反应分析仪，可参照本规范执行。