蛋白质的内源荧光主要来源于芳香族氨基酸如色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸。在水中，色氨酸的最大激发光波长在270-280nm左右而其发射光波长峰值接近350nm。蛋白的发射光谱对溶剂的极性和外界环境十分敏感。当蛋白质变性时，色氨酸残基会暴露在水中而其发射波长会变长。这种发射波长峰值的改变可以用来检测蛋白质的变性。

在这里，我们将展示如何运用SpectraMax®iD3多功能微孔板读板机检测内源色氨酸荧光。色氨酸标准曲线用来显示检测方法的高灵敏性，而色氨酸发射峰值的偏移则用溶菌酶变性实验来检测。溶菌酶包含有两个色氨酸残基，因此受到紫外光照射时会发射荧光。当溶菌酶降解时，色氨酸的发射光峰值会偏移6-10nm。我们可以对降解前后的溶菌酶进行荧光光谱扫描来捕获和检测发生的峰值偏移。

SpectraMax® iD3多功能微孔板读板机兼具内源色氨酸荧光检测所需的高灵敏度和波长扫描能力。另外，SoftMax® Pro 软件可以通过Spectral Optimization Wizard自动识别最最佳的激发和发射波长，同时自动计算发射峰值的偏移，并用于后续分析。
 

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