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新品上市|核酸质谱预处理试剂UNG体系
阅读：138发布时间：2023-7-21
PCR检测因其高灵敏度、快速、操作便捷等优势已经被广泛应用，不过正是由于它灵敏度极-高，少量的外源DNA污染即可与目的模板一起扩增，从而导致检测结果的假阳性。污染很容易发生，比如模板交叉污染、PCR试剂污染、PCR扩增产物污染(主要以气溶胶形式污染)以及实验室克隆质粒污染等，这几种情况中最-为严重的是扩增产物污染。为保证PCR结果的准确性，我们会引入UNG(也称为UDG，Uracil-DNA Glycocasylase，以下简称为UNG酶)酶防污染体系。
UNG（Uracil-DNA Glycosylase）是一种酶，其作用是识别和修复DNA中的尿-嘧-啶（U）残基。UNG主要参与DNA修复过程中的碱基切除修复机制。
PCR反应前，在一定条件下，UNG酶催化水解含有dU-DNA链中的尿-嘧-啶碱基和糖磷酸骨架的N-糖苷键，产生的缺嘧啶位点，释放游离尿-嘧-啶。然后进行热处理，使UNG酶失活。同时，高温使得缺嘧啶位点的磷酸骨架极易水解断裂，从而消除含有尿-嘧-啶的PCR产物的污染(如下图所示)。
飞行时间质谱分析系统核酸样本预处理试剂GR（含UNG）（货号：T400301）是一款具有强防污染能力、高质谱兼容性的试剂产品，由UNG酶体系、多重PCR反应体系、去磷酸反应体系和单碱基延伸反应体系等组成。该产品基于核酸质谱平台可对多种类型DNA样本的核酸预处理，并能高效应用于药物基因组学研究、遗传病诊断、病原体检测等领域，满足不同的研究需求。
本产品运用dUTP-UNG防污染系统，可有效去除PCR产物的残留污染，大大降低了由于扩增产物污染而导致的假阳性。UNG酶在PCR循环中的预变性步骤即可被灭活，因此不会影响新的PCR产物的形成。该产品为飞行时间质谱分析系统的核酸样本预处理提供了高效、可靠的解决方案，减少假阳性发生率，保证质谱分析结果的准确性和可重复性。
UNG酶体系有效预防非特异性PCR扩增和污染；
保持PCR完整性，保护核酸不被降解；
具有高扩增效率和优异的多重扩增能力。
图１. UNG酶体系对100 ng含dU DNA底物和不含dU DNA底物的消化情况电泳结果图
UNG酶体系在经过50℃ 10 min孵育后，含dU的DNA底物组的PCR条带基本消除，而不含dU的DNA底物组条带亮明亮。我们的UNG酶体系能够有效降解含dU的DNA底物。
图２. UNG-PCR体系与普通PCR体系对某SNP Panel污染去除能力测试的质谱结果对比图
UNG-PCR体系与普通PCR体系对某SNP Pane测试的结果相比，UNG-PCR体系能明显降低dU DNA带来的污染。我们的UNG酶体系在核酸质谱法中能够显著降低核酸质谱的污染风险，充分实验数据验证污染去除率可达95%。
图3. UNG酶体系、无UNG酶体系对同一样本扩增后的电泳结果图
UNG酶体系在经过50℃ 10 min孵育后再进行PCR反应，未出现明显条带亮度减弱、未出现明显杂带。我们的UNG酶体系能够保持PCR产物的完整性。
图４. UNG-PCR体系与普通PCR体系对某SNP Panel测试的质谱结果对比图
UNG-PCR体系与普通PCR体系对某SNP Panel测试的结果相当，基因型一致且评分未出现明显差距。我们的UNG酶体系能够保持核酸质谱检测的正确性。
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