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进行非标记细胞功能分析培养注意事项有哪些

时间:2021/4/1阅读:205
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   非标记细胞功能分析培养采用特殊工艺,将微电子细胞传感器芯片整合到表面适于细胞贴附与生长的细胞检测板的底部或细胞浸润迁移板的微孔膜,用以构建实时、动态、定量跟踪细胞形态和增殖分化等改变的细胞阻抗检测传感系统。
  注意事项:
  细胞培养好坏,模型建立成功与否是后续药物代谢和运输机制研究的关键。因此,建议针细胞培养过程进行严格的质控。
  01
  非标记细胞功能分析培养铺板前需要对培养细胞的状态进行鉴定,要求细胞死亡率不超过5%,同时,消化离心需要去除碎片和较大的细胞团。
  02
  细胞铺板需要将滤膜进行提前湿润,并且控制细胞密度,以防止细胞形成多层。并且建议16h内进行换液,以清除未贴壁的细胞或者减少细胞叠层的发生。
  03
  常规来说,细胞需要在滤膜上培养21-29天,以其表面表达多种转运蛋白和水解酶为标志,代表细胞的分化。对于后续的转运实验,细胞培养有一个前提就是需要单层细胞,而不是多层。因此,需要对细胞是否为单层进行形态学方面的探究。
  04
  对于每批次的细胞来说,需要对细胞单层完整性的量化控制对照实验,比较推荐用亲水性的细胞旁路分子marker,做转运实验,可以利用14C-*(带辐射性)或者luciferyellow(没有辐射性)对细胞单层完整性进行评估。
  05
  共聚焦显微镜条件下的形态评估,通常而言,利用鬼比环肽(对actin蛋白染色)单染,其足够确认细胞是否为单层状态,非标记细胞功能分析培养也可以利用紧密连接蛋白ZO-1或者荧光核染做免疫荧光染色进行确认。

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