苏州阿尔法生物实验器材有限公司
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TIANSeq rRNA Depletion Kit -RNA去除试剂盒试剂盒对于完整和部分降解的总RNA（如FFPE RNA）均具有较好的rRNA去除效 果，所获得的去除了rRNA的RNA样本可用于mRNA和非编码RNA高通量测序，可提高测序结果中有效数据比例，纯化产物也可用于随机引物cDNA合成或其它下游应用。
产品简介
TIANSeq rRNA Depletion Kit (H/M/R) 采用特殊设计的DNA探针与核糖体RNA（rRNA）结合，利用Ribo RNase H降解DNA-rRNA杂交链中的rRNA，从而去除人、小鼠、大鼠 总RNA中的细胞质核糖体RNA（28S、18S、5.8S、5S）和线粒体内核糖体RNA（16S、 12S），保留信使RNA（mRNA）和其它非编码RNA。
该试剂盒对于完整和部分降解的总RNA（如FFPE RNA）均具有较好的rRNA去除效 果，所获得的去除了rRNA的RNA样本可用于mRNA和非编码RNA高通量测序，可提高测序结果中有效数据比例，纯化产物也可用于随机引物cDNA合成或其它下游应用。
产品特点
推荐使用的其他试剂
1. 去除rRNA的RNA纯化：TIANSeq RNA Clean Beads (TIANGEN Cat#NG307)。
2. PCR检测rRNA去除效率，FastKing RT Kit (With gDNase) (TIANGEN Cat#KR116), SuperReal PreMix Plus (SYBR Green) (TIANGEN Cat#FP205) 。
注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1. 操作过程请注意避免核酸样品和产物之间的交叉污染。
2. 请使用不含RNA酶或DNA酶的枪头、离心管进行实验。
3. 实验开始前，请清洁操作台，建议使用RNA酶及DNA酶清除试剂处理台面。
确保没有 RNA酶和DNA酶的污染。
4. 瞬时离心，将样品置于PCR仪中（启用热盖99~105℃均可），按以下程序操作，总共耗 时约20 min。
注意：必须慢速降温(每秒降温0.1℃)，使探针与rRNA充分结合。
四、RNA纯化
推荐使用磁珠纯化产品TIANSeq RNA Clean Beads (TIANGEN Cat#NG307)，也可使 用Agencourt RNAClean XP (Beckman Coulter)。
1. 涡旋振荡混匀TIANSeq RNA Clean Beads，吸取110 μl （2.2倍体积） 至步骤三的50 μl RNA产物，用移液器吸吹混匀10次。
2. 室温静置15 min，使RNA充分结合到磁珠上。
3. 将样品置于磁力架上5 min，待溶液澄清后，用移液器小心移除上清。
4. 保持样品始终处于磁力架上，加入200 μl新鲜配制的80%乙醇 （每次实验需要新鲜配 制，因为乙醇易从空气中吸收水分，浓度降低影响实验效果）漂洗磁珠 （不要吹散磁 珠） ，室温孵育30 sec，小心移除上清。
5. 重复步骤4进行漂洗。
6. 取出离心管短暂低速离心 (<2000 g, 10 sec) ，使液体收集至管底，将样品放回磁力架， 用移液器小心弃去所有液体。
7. 保持样品始终处于磁力架上，开盖晾干磁珠3～5 min （不要过度干燥，否则可能降低 RNA回收率。洗脱应当在磁珠依然显深棕色且光亮，而且所有可见液体已挥发时进 行。若磁珠出现裂缝，则表示已过度干燥）。
8. 将样品从磁力架上取出，加入6.5 μl RNase-Free ddH2O ，用移液器吹打10次混匀磁珠， 室温静置2 min。
注意：上述洗脱体积适用于TIANSeq RNA文库构建试剂盒NR102或NR103，如搭配其他 RNA建库产品，请根据产品说明书选择合适的洗脱体积。
9. 在磁力架上静置2 min，待溶液澄清后，不要触动磁珠，小心吸取5 μl上清 （可根据步骤8 选择的实际洗脱体积进行相应调整，尽量充分利用洗脱产物）至新的Nuclease-Free PCR 管。
10. 洗脱样品可立即用于RNA测序文库构建或其他分析应用，也可在-20℃保存过夜或 在-80℃保存30天。
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