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阅读:120发布时间:2021-11-8
乳腺癌细胞凋亡水平上升时,包括 miR⁃145⁃5p 在内的多种 miRNA 水平上升 。miR⁃145⁃5p 与 ATF1 和乳腺癌细胞凋亡之间的联系,本研究旨在探讨 miR⁃145⁃5p 靶向调控 ATF1对乳腺癌细胞 MCF7 凋亡的影响。胎 牛 血 清(Thermo 公司)、1640 培养基(GE 公司)、pmiR⁃RB⁃Report 质粒(上海钦诚)、HiPerFect Transfection Reagent(德国凯杰),P21、BAX、ATF1、BCL⁃2、Caspase9、Tubulin抗体(英国 ABCAM),蛋白裂解液(碧云天)、山羊抗大鼠 IgG 和山羊抗兔 IgG(H+L)(艾美捷)、PBS(上海生工)、蛋白酶抑制剂(上海睿铂赛)、青* 混 合 液(上 海 索 宝)、ClonExpress II One StepCloning 试剂盒(南京诺唯赞),Luciferase 荧光素酶报告检测试剂盒(武汉艾美捷),U6 和 miR⁃145⁃5p荧光定量 PCR 引物、qPCR 和 miRNA 反转录试剂盒(广 州 复 能 基 因),miRNA 快 速 提 取 试 剂 盒(HaiGene)、Western blot 装置(美国伯乐公司),细胞培养箱、生物安全柜购和酶标仪(美国 Thermo)、微量加样器(法国 Gilson)、冷冻离心机(德国 Ep⁃pendorf)、旋转摇床(江苏海门市其林贝尔)、脱色摇床(大龙兴创)、荧光定量 PCR 仪(美国 ABI);miR⁃145⁃5p 序列来自 miRBase,miR⁃145⁃5p 模似物和 miR⁃145⁃5p 抑制物由上海生工生物工程股份有限公司合成。
miRNA 是 内 源 性 22nt 非 编 码 RNA,其 靶 向mRNA 用于切割或翻译抑制。许多 miRNA 调节程序性细胞死亡,包括细胞凋亡、自噬和坏死性凋亡。一系列研究表明,miR⁃145⁃5p 是几种肿瘤的肿瘤抑制因子,如结肠癌 、乳腺癌、和前列腺癌 ,而 miR⁃145⁃5p 抑制乳腺癌的机制尚未报道。ATF1 是构成基本*拉链转录因子的亚家族的一员,介导各种细胞外信号的转录反应,它参与细胞活力和细胞转化 。
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