1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 菌株和试剂
黄原胶高产菌株 XccYH1 由本实验室通过基因工程方法获得。抗生素*购自 Sigma 公司。
1． 1． 2 仪器
PB － 10 pH 计( SAＲTOＲIUS AG) ; MP2002 电子天平( 上海恒平科学仪器有限公司) ; DHP － 9052 型电热恒温培养箱( 上海一恒科学仪器有限公司) ; SW － CJ － 2FD 洁净工作台( 苏州安泰空气技术有限公司) ; ZHWY200B 恒温培养振荡器( 上海智城分析仪器制造有限公司) ; LS － B50L －Ⅱ立式压力蒸汽灭菌锅( 江阴滨江医疗设备有限公司) ; QL －902 漩涡混合仪( 海门市其林贝尔仪器制造有限公司) ; DHG－ 9240 鼓风干燥箱( 上海一恒科学仪器有限公司) 。
1． 2 方法
1． 2． 1 野油菜黄单胞菌胞外多糖的检测
将菌株 XccYH1接种于 NYG 液体培养基( 5 g /L 蛋白胨，3 g /L 酵母粉，20 g /L甘油) 中，30 ℃ ( 200 r/min) 摇床培养 24 h 后，调整菌体浓度至 OD600约为 1． 0，并按 1% 的比例接种至含 4% 碳源的 NYG 中( 含相应抗生素) ，30 ℃ ( 200 r/min) 摇床培养 5 d后，加入 4 倍体积的无水乙醇沉淀胞外多糖，边注入边搅拌，然后将絮状沉淀物取出后置于 42 ℃ 充分干燥，所得即为黄原胶。以黄原胶重量作为衡量发酵效果的标准。
1． 2． 2 碳源对黄原胶发酵的影响
以淀粉、葡萄糖、麦芽糖和蔗糖作为培养基碳源，考察碳源对黄原胶发酵的影响。在NYG 中加入 4% 淀粉、4% 葡萄糖、4% 麦芽糖和 4% 蔗糖作为培养基，按照“1． 2． 1"方法进行黄原胶发酵，每组发酵设计平行做 3 个。
2 结果与分析
为进一步提高基因工程菌 XccYH1 的黄原胶产量，首先探索不同碳源对黄原胶产量的影响。以淀粉、葡萄糖和麦芽糖为碳源时，黄原胶产量无显著性差异，而以蔗糖为碳源时，所产的黄原胶产量，后续试验中以蔗糖作为碳源测定黄原胶产量。在低浓度碳源( 2% ～ 6% ) 时，黄原胶产量随着浓度的增加而显著增加，当添加 6% 蔗糖时黄原胶 产 量 ，达20． 3 g /L。但继续提高碳源浓度到 8% ，显著抑制菌体生长，也没有检测到黄原胶。因此，碳源浓度为 6% 时，黄原胶产量。基因工程菌的稳定性往往是能否进入工业化应用的重要评价指标，在非抗生素压力条件下稳定性好的菌种将具有更好的应用前景，该研究将 XccYH1 菌株在无抗性的培养基上连续划线传 10 代后，菌落形态没有差异，进一步考察了传不同代数时黄原胶的产量。
3 结论与讨论
野油菜黄单胞菌( Xcc) 是十字花科植物黑腐病菌的病原菌，在范围内引起植物病害，造成重大的经济损失。Xcc在植物侵染过程中产生众多的致病因子，包括蛋白酶、纤维素酶、胞外多糖等，因此 Xcc 也是研究细菌与植物互作的模式菌种。另一方面，Xcc 产生的胞外多糖( 黄原胶) 又具有重要的工业价值，在食品、药品、化妆品等诸多领域中有广泛的应用。
免责声明：文章仅供学习和交流，如涉及作品版权问题需要我方删除，请联系我们，我们会在时间进行处理。
