胰脂肪酶是一种由动物或人类胰腺分泌的水溶性脂肪分解酶，在甘油三酯的消化中发挥着重要胰脂肪酶是一种由动物或人类胰腺分泌的水溶性脂肪分解酶，在甘油三酯的消化中发挥着重要发生率的逐年上升，药物治疗成为治疗肥胖症的有效手段之一。
１ 材料与方法
１．１ 仪器与软件
ＴＵ－１８１０紫外可见分光光 度计（北 京 普 析 通 用 仪 器 有 限 责 任 公 司）；ＭｕｌｔｉＳｋａｎＦＣ酶标仪［赛默飞世尔科技（中国）有限公司］；QL-866涡旋混合器（海门市其林贝尔仪器制造有限公司）；ＤＺＫＷ－４电热恒温水浴锅（北 京 中 兴 伟 业仪器有限 公 司）；ＦＡＩ６０４万 分 之 一 天 平（上 海 天 平仪器厂）；ＪＡ５００３Ｂ千分之一天平（上海越平仪器有限公司）；ＳｉＧｍＡ 高速冷冻离心机（北京五洲东方科技发 展 有 限 公 司）；Ｂｒａｎｄ 移 液 枪 （德 国 Ｂｒａｎｄ 公司）；ＫＱ５２００Ｅ*（昆山市超声仪器有限公司）；ＳＴＡＲＴＥＲ２１００ＰＨ 计（深圳市展华仪器仪表 有 限 公 司 ）；ＧａｓｔｒｏｐｌｕｓＴＭ （Ｖｅｒｓｉｏｎ９．５．０００４ＳｉｍｕｌａｔｉｏｎｓＰｌｕｓＩｎｃ．，Ｌａｎｃａｓｔｅｒ，ＣＡ，ＵＳＡ）；ＡＤＭＥＴＰｒｅｄｉｃｔｏｒＴＭ软件（Ｖｅｒｓｉｏｎ８．１．０．０）。
１．２ 试 剂
猪 胰 脂 肪 酶 （上 海 源 叶 生 物 有 限 公司）；对硝基苯基棕榈酸酯（Ｐ－ＮＰＰ）（≥９８％，阿法埃莎化学有限公司）；脱氧胆酸钠（纯度：＞９９．０％，上海江莱 生 物 科 技 有 限 公 司）；二 甲 基 亚 砜（ＤＭＳＯ）（北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司）；*、异丙醇、高 氯 酸（北 京 化 工 厂）、氢 氧 化 钠（天 津市光复科技发展有限公司）均 为 分 析 纯；奥 利 司 他（纯度：≥９８％，中山万汉医药科技有限公司）、新利司他（纯度：≥９８％，上海源叶生物科技有限公司）；娃哈哈饮用纯净水（杭州集团娃哈哈有限公司）。
１．３ 方法
１．３．１ 胰脂肪酶溶液的制备
精密称定胰脂肪酶１００ｍｇ，于 ５０ ｍＬ 离 心 管，加 入 １０ ｍＬ 冷 的 ５０ｍｍｏｌ·Ｌ－１磷 酸 盐－５ｍｍｏｌ·Ｌ－１脱 氧 胆 酸 钠 缓 冲 液（ｐＨ８．０），３０００ｒ·ｍｉｎ－１涡旋５ｍｉｎ，４ ℃下离心半径７．４ｃｍ，７０００ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ，倾出上清液至一新的离心管，即得。使用时保存在０～６℃冰水浴环境。
１．３．２ 胰脂肪酶抑制剂ＩＣ５０的测定
精密称取*、新 利 司 他 各 １０ ｍｇ 至 于 １０ ｍＬ 量 瓶 中，ＤＭＳＯ 溶解并 定 容，冷 藏 储 存，使 用 前 取 出 室 温 融化，摇匀后以缓冲液稀释得系列不同浓度的抑制剂溶液（*终浓度０～２８８０ｎｍｏｌ·Ｌ－１；新利司他终浓度０～６１４４ｎｍｏｌ·Ｌ－１）。分别取０．３ｍＬ抑制剂溶液和上述已制备的酶溶液于试管中，加缓冲液补至２．７ｍＬ，摇匀，３７ ℃水浴温孵１５ｍｉｎ，加入１ｍｍｏｌ·Ｌ－１ｐ－ＮＰＰ底物溶液０．３ｍＬ，３７℃水浴１０ｍｉｎ后立即于４０５ｎｍ 测定其吸光度，空白以等量不含抑制剂的 溶 液 代 替，每 组 反 应 平 行３次。ＩＣ５０计算采用公式（１），其中 Ｋ 为曲线的上限值，ａ为增长速度，采用三参数ｌｏｇｉｓｔｉｃ曲线拟合求解。
２ 结果
胰脂 肪 酶 作 用 于Ｐ－ＮＰＰ分解出 对 硝 基 苯 酚 （Ｐ－ＮＰ），该 产 物 在 ４０５ｎｍ 处有吸收峰，浓度 与 吸 光 值 成 正 比。测 定 奥 利司他、新利司他在不同浓度条件下与酶反应后的吸光度，从 而 得 出 其 对 胰 脂 肪 酶 的 抑 制 活 性。*、新利司他对胰脂肪酶的抑制考察，随着抑制剂浓度的增大，抑 制 率快速增大， 抑 制 率 均 近１００％。采用 公 式（１）计算得*的ＩＣ５０为１９．１ｎｍｏｌ·Ｌ－１，新利 司他的ＩＣ５０为７６ｎｍｏｌ·Ｌ－１。
３ 讨论
*和新利司他作为强效的胃肠道脂肪酶抑制剂，是目前*的用于治疗肥胖症的药 物。本研究测定得 奥 利 司 他 的ＩＣ５０为１９．１ｎｍｏｌ·Ｌ－１，新利司他的ＩＣ５０为７６ｎｍｏｌ·Ｌ－１，均为纳摩尔级抑制。尽 管ＩＣ５０对 评 估 药 物对酶的潜在抑制作用有较大的价值，但因其只能反应药物－靶标结合的平衡状态，不能反映整个结合的动力学过程，且无法预测药物对酶抑制的快慢和作用持续的时间等，存在较大局限性使其无法与体内的药效活性建立关联。
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