人乳头瘤病毒( HPV) 是目前被确定的可引起宫 颈癌的病因。所以控制 HPV 感染可以有效控制宫颈 癌的发生。人类的皮肤黏膜是其天然宿主，皮肤和 黏膜的破损是 HPV 感染的启动条件，HPV 病毒通过 受损的上皮组织进入基底层细胞，在细胞内复制繁殖， 其复制周期受到严格的调控，并依赖于病毒编码的蛋 白质和宿主上皮细胞的分化程度。皮肤和黏膜是 预防 HPV 感染的道屏障，任何影响和破坏这道屏 障的因素都可以诱发 HPV 的感染。阴道微环境是黏 膜屏障新陈代谢的基础，所以阴道微环境与 HPV 的感 染有很密切的关系。
1 资料与方法
1． 1 一般资料
2017 年 3 月至 2018 年 3 月在我院自 愿进行 HPV 基因分型检测的 462 例女性患者，年龄 20 ～ 82 岁，其中 30 ～ 50 岁女性最多。严格按照试剂说明 书或微生物采集手册采集方法及注意事项采集，运送 及贮存标本。采用 PCＲ-反向点杂交技术检测 HPVDNA 的分型情况，使用阴道炎联检试剂盒( 化学反应 法) 检测阴道微生态情况。
1． 2 仪 器
与 试 剂 HPV 分型基因测试盒和 ABI StepOnePlus 基因扩增仪均由艾康生物科技有限公司 提供; 分子杂交仪购自兴化市分析仪器厂; 台式高速冷 冻离心机来自湖南湘仪实验仪器开发有限公司; 式恒温器，微型混合器，微型离心机均来自海门市其林贝尔仪器制造有限公司，移液器由赛默飞世尔仪器有限公 司提供。
1． 3 方法
1． 3． 1 样本采集及保存
先按照阴道炎联检试剂盒使 用说明书标本采集要求，采集白带标本。再由医生以 扩阴器暴露宫颈口，先用棉拭子将宫颈口过多的分泌 物擦去，检测标本为宫颈黏膜上皮细胞，为鳞-柱 交界处的上皮细胞。取柔软的伸入宫颈，通过 鳞-柱交界处，直到看不到刷子头，旋转 10 ～ 20 s，取 出，将其放入细胞保存液中，密闭送检，并注明惟一编 号，将两份标本同时尽快送检。
1． 3． 2 阴道炎联检试剂盒检测检测方法及结果判读
将沾有标本的拭子取出，置于反应管中加 6 滴标本提 取夜，反复挤压棉签使样本溢出。将溢出标本液滴于 测试卡的孔位于 35 ～ 37℃温育 15 min，然后在 β-N-乙 酰氨基酸葡萄糖苷酶( NAG) 和唾液酸酐酶( SNA) 滴 加一滴显色夜，2 min 后立即判读结果。过氧化氢酶 H2O2 显示紫红色为阴性，提示正常，不显色表示阳性， 提示菌群失调; 白细胞酯酶( LE) 不显色表示阴性，提 示正常; 显蓝色或绿色表示阳性，提示有炎症; PH 值 ＞ 4． 5 为异常，有利于致病菌侵入及生长; β-葡聚糖醛 苷酸酶( GUS) 不显色表示阴性，提示正常; 显蓝色或绿 色表示阳性，提示有大肠埃希菌等需氧菌感染; 唾液酸 酐酶( SNA) 不显色或显黄色表示阴性，提示正常; 显蓝 色或绿色表示阳性，提示有细菌性阴道病; β-N-乙酰氨 基酸葡萄糖苷酶( NAG) 不显色表示阴性，提示正常; 显黄色表示阳性，提示阴道保护性黏膜蛋白屏障被破 坏，阴道黏膜处于易感状态或已被白色念珠菌等微生 物感染。
1． 3． 3 HPV-DNA 的提取及扩增
取出保存的标本平 衡室温 1 ～ 2 h，对标本和对应 1． 5 ml 离心管管进行惟 一编号，震荡混匀标本，取 1 ml 混悬液于已编码的 1． 5 ml离心管中12 000 r/min 离心10 min，去上清液加 50 μl 核酸提取液，100℃干浴器10 min 后12 000 r/min 离 心 10 min，取 5 μl 核酸提取液加入 45 μl 的核酸反应 液，扩增产物如不能立即使用，密封放于 － 20℃冰箱保 存备用。扩增时间设定为: 50℃ 2 min; 95℃ 15 min; 94℃ 30 s，45℃ 1 min，72℃ 30 s，进行 50 个循环; 72℃ 延伸 10 min。
1． 3． 4 杂交、洗膜和显色
按照杂交液试剂配置说明 新鲜配置溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ、结合液和显色液。 杂交: 将 5 ml 溶液Ⅰ加入到 15 ml 塑料管中，膜条按照 样本编码进行标记放入 15 ml 塑料管中，然后依次加入 50 μl PCＲ 扩增产物，拧紧盖子，于 42℃杂交仪中杂 交 60 min，同时将 50 ml 溶液Ⅱ于杂交仪中预热至 42℃。洗膜: 杂交结束后取出膜条，转移至预热 50 ml 溶液Ⅱ的管中，42℃杂交仪中洗涤 10 min。显色: 新鲜 配置结合液，膜条装入结合液管中，于室温摇床轻摇 10 min; 取出膜条放入 50 ml 溶液Ⅰ管中室温轻摇洗 2 次，5 min /次，再用 50 ml 溶液Ⅲ室温摇洗 2 min。新 鲜配 置 显 色 液，将膜条浸泡于显色液中轻摇 5 ～ 10 min，最后将膜条移至纯水中终止显色。将膜条展 开在白纸上，根据检测位点的信号观察结果。
1． 4 统计学分析
应用 SSPS 24． 0 统计软件，计数资 料比较采用 χ2 检验，P ＜ 0． 05 为差异有统计学意义。
2 结果
462 例患者 进行 25 种 HPV 基因型检测，其中包括 14 种高危型: HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73; 3 种疑似高危型: HPV26、53、66; 8 种低危型: HPV6、 11、40、42、43、44、81、83。除高危型 HPV45 和低危型 HPV40 无人感染外，其余类型均有感染。462 例患者 HPV 阳性感染率为 19． 5% ( 90 /462% ) ，感染高危型 HPV 的患者 65 例，感染率为 14． 1% ( 65 /462% ) ，占 HPV 阳性的 72． 22% ( 65 /90% ) ，感染低危型 HPV 的 16 例，感 染 率 3． 5% ( 16 /462% ) ，占 HPV 阳 性 的 17． 78% ( 16 /90% ) ; 感染疑似高危型 HPV 的 9 例，感 染 率 1． 9% ( 9 /462% ) ，占 HPV 阳 性 的 10% ( 9 / 90% ) 。单一型感染有 61 例，占 HPV 阳性的 67． 78% ( 61 /90% ) 两型及以上感染的有 29 例，占 HPV 阳性的 32． 22% ( 29 /90% ) 。90 例 HPV 感染阳性患者检出不同型别数合计 122 次，对多重感染者，各型别分别单独计算。20 ～ ＜ 30 岁、30 ～ ＜ 40 岁、40 ～ ＜ 50 岁和50 ～ ＜ 60 岁4 组 感染 HPV 患者数比较，40 ～ ＜ 50 岁最多 56 例，30 ～ ＜ 40 岁有 34 例感染，20 ～ ＜ 30 岁有 16 例，50 ～ ＜ 60 岁 有 13 例感染，65 岁和 82 岁分别有 1 例感染 HPV16 型，1 例 72 岁患者感染 HPV31 型。表 2 显示高危型 HPV16 是感染最多的型别，感染率为 16． 39% ( 20 / 122% ) ，明显高于其他 HPV 型别。
3 讨论
HPV 广泛存在，人类的 HPV 感染率很高。在自 然人群中，HPV 感染率从低于 1% 到高达 50% ，在性 活跃人群中 20% ～ 80% 的人有 HPV 感染史。HPV 侵入人体后，停留于感染部位的皮肤和黏膜中，并进行 增殖，不进入血液，也不产生病毒血症。20 世纪 70 年代德国人哈拉尔德·楚尔·豪森提出 HPV 与宫颈 癌有关系，1995 年国际癌症学会确定: HPV 是宫颈癌 的主要病因。2008 年 10 月 6 号哈拉尔德·楚尔·豪 森因发现 HPV 获得诺贝尔奖。此后经过科学家及医 学专家多年的研究证明，高危型 HPV( 人乳头瘤病毒) 持续感染是诱发宫颈癌发生发展的的比较明确的病因。
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