大鼠缺氧诱导因子1α（HIF-1a）试剂盒对内皮化关系的研究

    随着静脉移植在治疗冠心病和周围动脉缺血性疾病中的广泛应用，内膜增殖所引起的移植静脉狭窄成为影响术后远期效果的主要因素。据统计，静脉移植术后早期(移植后30天内)静脉阻塞率达5-26％；在晚期(移植后2年以上)，动脉重建后的5年累积阻塞率高达40％。这主要是由于血管内膜增生(IH)及粥样硬化导致的再狭窄所致，严重影响了远期疗效。

    内膜增生的发生机制尚不明确，但大量文献揭示，损伤、缺血、血小板衍生促生长因子、动脉血液动力学及移植静脉与动脉的顺应性差异等多种因素，均和内膜增生的发生、发展有关。目前认为：血管内皮细胞(VEC)结构与功能的完整性在维持血管正常结构与生物学功能及移植血管重塑过程中起着重要作用。静脉移植术中机械性损伤及慢性缺血缺氧等因素均可导致VEC受损，引起术后移植静脉IH、血管再狭窄。早期恢复VEC结构及其生物学功能，即再内皮化，已成为防治移植静脉IH的重要途径之一。如何抑制移植静脉内膜增生是血管外科亟待解决的重大课题之一。深入研究移植血管再内皮化相关基因，将为其在基因治疗方面提供重要的实验依据。 缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)是近年来备受重视的与血管形成和生长有关的转录因子，其调控着与内皮细胞分裂和增殖密切相关的血管内皮生长因子(VEGF)基因的表达。

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   因此，本实验通过观察移植静脉中HIF-1α与VEGF表达水平及其二者关系，探讨HIF-1α表达水平与移植静脉再内皮化的关系。 方 法 本试验采用间置移植W8for大鼠颈内静脉于同侧颈总动脉动物模型。6o只i Sfor大鼠（中国医科大学实验动物部提供L雌雄不拘，体重K50。40）才只，3个月龄。随机分为3组，模型二个组和对照组，每组20只。前者行自体右颈内静脉移植到同侧颈总动脉术。后者不施加任何干预。术后7d与14d切取移植静脉。所取标本用10％中性甲醛固定或液氮速冻后置于一70℃深冻冰箱中保存。分别用蛋白印迹法（ 咖g人免疫组织化学及电镜等检测或观察 HIF－la和 VEGF表达水平及再内皮化过程。 结 果 在本实验中，我们通过大鼠移植静脉模型观察到，实验组中＊IF一la与＊＊＊r表达均较对照组显著 ＊均＜o．01），＊1只一la阳性表达细胞均较对照组显著户均＜o．肪。在术后7d，损伤静脉内皮开始自身修复，出现部分内皮化在再内皮化过程，HIF－la蛋白与 VEGF蛋白表达较为显著。术后 14d时，再内皮化进程较前减慢，HIF一 与 VEGF表达较前有所减弱。再者，HIF—la在蛋白水平的表达与VEGF表达和VEC再内皮化的变化均表现出一种平行趋势。术后7d与14d相比较：移植静脉再内皮化显著；＊IF－1。和＊EGF蛋白表达增强k均＜o．01人增生内膜中HIF八 阳性表达细胞增多。HIF则 与 VEGF表达呈正相关h二 0．9026，p＜0．01）。 ·2· 结 论 在移植静脉重塑早期，HIF－la通过对VEGF的调控参与并 促进了VEC的增殖和受损内皮再内皮化的进程。移植静脉得以 较长时间不出现栓塞和狭窄可能与损伤血管内皮再内皮化相关基 因 HIF八 a的表达水平上调有关。HIF一h参与抑制 IH演变过 程可能是通过 HIFJ 对 VEGF调控机制和 HIF－h诱导 VSMC 凋亡来实现的。

因此，我们认为 HIF叶 a在损伤性 VEC自身修复 过程中起着重要作甩，与移植静脉再内皮化过程密切相关；HIF－ la在移植静脉重塑早期表达不足是引起移植静脉 IH的重要基因 之一。