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1．酶标直接法和间接法
Nakane（1966）将辣根过氧化物酶（HRP） 标记在抗体免疫球蛋白分子上，创建了酶标记免疫组化的直接法、间接法和桥法。
2．PAP法
Stemberger（1969）在酶桥法的基础上，建立了非标记抗体法，先将HRP免疫兔、羊或鼠，制成抗HRP抗体，再与HRP结合，制备成PAP复合物，其敏感性要比酶标直接法、间接法高出许多倍，其背景染色也要优于直接法和间接法。在此基础上又出现了许多PAP法变型方法，如双PAP法、ASPAPAP法、APAAP法等。
3．ABC法
20世纪60年代初，人们发现*（biotin）与亲和素（卵白素，avidin）之间具有高度的亲和性，是自然界中具有zui强亲和力的物质之一。到了20世纪70年代，人们又发现*可以和抗体交联，且*或亲和素与过氧化物酶或荧光素结合后，并不影响它们的生物学活性。Guesdon等（1979）提出了标记*、亲和素以及*—亲和素搭桥法。在此基础上，许世明（1981）建立于标记亲和素、*间接桥法和ABC法。此方法已沿用了几十年，得到普遍认可，物美价廉，背景干净，但是缺点是操作比较麻烦，灵敏度没有目前一些新的检测系统高。SP法（或称LSAB法）在ABC法基础上作了许多改进，将链霉亲和素直接偶合在一起，减少了操作步骤，增加了灵敏度。现zui大的问题是内源性*的干扰，造成非特异性背景染色，从而直接影响到对染色结果的判断。尤其在人体肝、肾、肠等组织中存在丰富的内源性*，加上目前常规应用的抗原修复方法可以激活内源性*，非特异性背景染色在某些组织的免疫组化染色中已变得尤为突出。为了克服这一缺陷，人们想出了许多种克服的方法，例如在抗原修复后用亲和素或用20％鸡蛋清进行封闭，但是效果往往不够理想。另一种克服方法是采用由Zymed公司推出的NBA（非*检测系统）。该系统用FITC代替*与二抗结合，三抗是结合了HRP的抗FIT抗体，而不用链霉亲和素—HRP复合物。由于在人体组织中到目前为止尚未发现有内源性的能与FITC结合的物质，从而避免了因非特异性结合而产生的非特异性假阳性背景染色。
虽然NBA系统成功地克服于非特异背景染色，而且具有与*—亲和素检测系统相同的敏感性，但是却没有使检测步骤有任何简化。在实际工作中，为了适应临床病理越来越多的日常工作需求，人们渴求一种更加简便易行的方法，先后有多家公司推出二步法敏感的免疫组化检测系统试剂，例如EnVision试剂、PicTureTM—plus和SuperPictureTM—plus试剂、UIP试剂和PowerVisionTM试剂。
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