苏木素伊红染色液的技术要点

苏木素伊红染色液套装组合：Harris* 50ml，水溶性伊红染色液 50ml，苏木素染色分化液 50ml，苏木素染色返兰液 50ml

苏木素伊红染色是组织病理学经典的常规染色方法，历经上百年的应用历史至今仍*。因此，苏木素伊红染色是病理切片制作中极为重要的技术环节。

染色方法：
1. 切片脱蜡 二甲苯I 5分钟，
2. 切片脱蜡 二甲苯II 5分钟，
3. 100％1、100％2、95％1、95％2、70％梯度乙醇各30，秒钟，
4. 自来水流水冲洗1分钟，
5. 苏木素染色5—8分钟（依染液新旧调整染色时间），
6. 自来水流水冲洗1分钟，
7. 进入分化液分化数秒钟，
8. 自来水流水冲洗1分钟，
9. 进入返兰液处理5—10秒钟，
10. 自来水流水冲洗2分钟，
11. 进入伊红染色液1-3分钟，
12. 自来水冲洗30—60秒钟，
13. 75％I、75％II乙醇脱水分色各10秒钟，
14. 95%乙醇1、95%乙醇2各脱水10秒钟，
15. 100％乙醇1、100％2脱水30-60秒钟，
16. 二甲苯1、二甲苯2透明各1分钟，
17. 中性树胶封固。

染色技术要点：
*在静止由于时染液表面于空气中的氧分子接触极液体代表面水分蒸发会产生氧化作用并形成氧化膜。因此，在使用前应使用滤纸吸附去除氧化膜以免污染切片。一般情况下应建立良好的使用习惯，每隔2～3天将苏木素染液*过滤一次。为保证HE切片的 恒定染色质量建议每500ml*染1200～1500张切片为宜。

*在用于免疫组织化学染色的的复染时应注意调控染色时间，核染色过浅不易辨识组织结构而核染色过深则喧宾夺主，一般复染的时间应控在10-30秒以内。此外，复染后的分化和返兰步骤不应省略否则将造成整张切片呈淡蓝色，使DAB呈现土黄色。

分化和返兰步骤是HE染色关键点，应在染色 实践中依据分化液和返兰液的新旧调整分化和返兰的处理时间。在使用自动染色机染切片是应注意在机械臂运行时分化液仍在进行分化反应，应适当缩短分化液处理掉时间或用70％乙醇适当稀释分化液以免分化过度。

70％乙醇对伊红具有分色和脱色作用，使伊红在不同的 组织结构和 病变区域形成不同层次的 红色。因此，伊红染色以适当深染为宜，以便在70％乙醇分色脱水后能显现明显的色阶和色深度。

100％乙醇和二甲苯的纯净度是保证染色后切片透明度和显微镜下清晰度的重要前提，在湿度较大的情况下应注意试剂的更换。干燥后封片是造成细胞核结构不清的重要原因之一，应尽可能避免。