RIA常用的分离方法

 1．第二抗体沉淀法
其原理是用RIA反应中的试剂抗体(一抗)如豚鼠的IgG免疫另一种动物(如羊)，制得羊抗豚鼠IgG血清(一抗)。RIA反应结束时，加入二抗，使其形成抗原-一抗-二抗的双抗体复合物；但因一抗含量甚微，此复合物也少，不易离心分离，一般还需加入一定量的与一抗同种动物的血清或IgG，使其与二抗形成较大量的可见沉淀物，与双抗体复合物共沉淀；离心后，即可有效地分离B和F。也可将二抗与某些颗粒固相物连接，制成固相二抗，分离B、F效果也好。

2．聚乙醇(PEG)沉淀法
PEG能非特异地沉淀抗原抗体复合物等大分子蛋白质，而不沉淀小分子抗原，因此PEG被广泛用于RIA实验作沉淀剂。其优点是沉淀*，经济方便，但非特异性沉淀较多，且当温度高于30~C时，沉淀物易复溶。

3．PR试剂法
先将二抗与PEG按一定比例混合成悬液后进行试验。是将二抗法和PEG法沉淀原理相结合的方法。此法保留了二者的优点，节省了二者的用量，且分离迅速，简便。

4。活性炭吸附法
活性炭可吸附小分子游离抗原或半抗原，而大分子蛋白(如抗体和免疫复合物)则留在溶液中。抗原抗体反应后，加入活性炭颗粒，使游离的标记抗原(F)吸附到颗粒上，再离心使颗粒沉淀，上清液中含有的标记抗原抗体复合物(B)供测定。该法主要用于测定小分子抗原或药物的RIA。