上海百蕊为大家提供：WB实验的详细操作步骤

蛋白定量

1 标准曲线的绘制：取一块酶标板，按照下表加入试剂

2. 根据样品数量，将BCA试剂A与试剂B按体积比为50:1配制适量BCA工作液，充分混匀；

3. 各孔加入160μl BCA工作液；

4. 把酶标板放在振荡器上振荡30sec，37℃放置30分钟，然后在562nm下测定吸光度。以吸光值为横坐标，蛋白浓度（μg/μl）为纵坐标，绘出标准曲线；

5. 在酶标板中加入2μl待测蛋白和18μl PBS（稀释10倍），加入160μl BCA工作液，把酶标板放在振荡器上振荡30sec，37℃放置30分钟，然后在562nm下测定吸光度。

6. 根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白浓度（μg/μl），乘以样品稀释倍数（10）即为样品实际浓度（单位：μg /μl）。

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