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检测AIP酶的实验中,对组织和培养细胞的前处理

时间:2015-8-5阅读:826
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组织的前处理:(组织匀浆上清液的制备参考实验方法学)

准确称取组织重量,按重量(g):体积(ml)=19的比例,加入9倍体积的生理盐水,冰水浴条件下机械匀浆,2500/分,离心十分钟,取上清液(即10%的匀浆上清液),再用生理盐水10倍稀释成1%,同时用考马斯亮蓝试剂测定蛋白组织(本公司有售)。如果预试结果太高,再将1%的组织匀浆稀释成不同浓度再进行预试后再决定取样浓度。

培养细胞的前处理:将培养细胞消化,离心,弃上清,留下层细胞,每管加0.2—0.3ml生理盐水或匀浆介质制备成107/cm3细胞悬液,即107/ml,再进行破碎。破碎细胞的方法有三种:A.用匀浆器匀浆 B.用超声粉碎器粉碎 C.反复冻溶3次(C方法有时会影响酶活力)。制备好的细胞悬液不需要离心,同时用考马斯亮蓝试剂测定组织蛋白。再将细胞匀浆液稀释成不同浓度进行预试,根据预试结果决定取样浓度

 在测试加样前要摇匀后取样

      不可用磷酸盐缓冲液或含磷的试剂作为样本匀浆或稀释样本。

 预试结果将吸光度值(测定管吸光度值-对照管吸光度值)控制在0.2左右为宜。

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