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PACBIO RS测序仪简单介绍

时间:2011-10-29阅读:1499
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PACBIO RS测序仪作为第3代测序仪终于诞生了,与之前测序仪相比,它究竟好在哪里,有哪些优点呢?

与其他单分子测序仪类似,PacBio RS在标记的核苷酸掺入到单链DNA分子时读取那一瞬的荧光。然而,这项技术的与众不同之处在于锚定的DNA聚合酶实时处理核苷酸结合。大部分第二代测序技术需要洗掉聚合酶周围的核苷酸,简化检测,但减慢了整个过程。PacBio RS则避免了多次洗涤的需要,将单个DNA聚合酶锚定在反应孔的底部。

标记的核苷酸涌入反应孔,自由扩散。当聚合酶检测到正确的核苷酸时,便将其掺入新生链中,这个过程需要几毫秒,而单纯的扩散只需要几微秒。这种时间差使掺入的核苷酸产生了很高的信号强度,类似于脉冲信号。反应孔的底部有一个非常小的孔,小到比探测激光的单个波长还要短。激光波长为600 nm,在进入反应孔后迅速衰减,因此,只有底部30 nm被照亮,让孔外的标记核苷酸处于黑暗之中,从而大大降低了背景信号。

 

鉴于PacBio RS实现了DNA聚合过程的实时检测,所以研究人员能在短短的几分钟内对长片段DNA进行测序。从样本制备到测序,所需的时间还不到一天。典型的测序运行时间低至30分钟。这在之前是无法想象的。此外,PacBio RS目前的读长超过1kb,比第二代测序要长得多。试剂消耗和样本制备也极少,不需要常规的PCR扩增,失误也大大减少。

总的说来,测序速度、读长、灵活性让PacBio RS从第三代测序仪中脱颖而出。




 

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