技术员解析流式抗体的选择及注意事项

由于在流式细胞实验过程中，荧光抗体对单细胞悬液的标记效果直接影响实验的数据质量。因此，需要考虑各种影响流式抗体品质及检测效果的因素，例如抗体特异性、荧光素信号强弱、荧光素标记方式、同型对照等。这些对初次实验无任何经验的学者来说相比是很困难完成实验的，对此上海劲马生物特派技术部技术员李工为我们解析流式抗体该如何选择及其注意事项。方便初学者学习。
李工说流式抗体的选择应该具有以下几点

1. 流式抗体本身也是抗体，所以选择流式抗体一定要满足抗体选择zui基本的条件：目标蛋白特异性，反应种属以及应用实验。

2. 流式抗体荧光标记的方式包括直接标记和间接标记两种。在流式实验过程中，尽量减少实验工序和过程，以保证实验的真实和准确性。因此在条件允许的范围内，建议尽量用直接标记的抗体进行实验而不去做间接标记。

3. 流式抗体荧光标记的选择：如果实验中检测单一指标：不同荧光标记在不同的仪器上强度不同。FACS Calibur仪器为例：PE ＞APC ＞PE-Cy5 ＞PerCP ＞FITC ＞PerCP-Cy5.5，通常来说，PEzui强，适用于弱表达抗原。FITC强度较弱，适用于强表达抗原，使用范围比较广。用户需根据检测的目标蛋白进行具体选择。如果同时检测多个指标：确认流式细胞仪能检测多少个通道：流式抗体每个通道只能选择1种荧光素。各个通道之间的荧光素可以随意搭配。如：实验者同时检测三个指标，可以在图1中绿色、黄色和红色三个通道中各选一个适当的荧光素标记，FITC、PE和PE-cy5。切忌所有指标选择同一个通道的荧光标记，以防止荧光的重叠和相互干扰，影响zui后结果。因此，流式细胞仪的通道越多，同一份样本能同时做的表面/胞内标志就越多。常用荧光标记包括FITC, PE, PEcy5, PEcy5.5, APC等。

流式抗体与同型对照的选择：

流式细胞实验和其他抗体相关实验有点不同的就是需要选择同型对照。同型对照，是用于消除由于抗体非特异性结合到细胞表面而产生的背景染色，相当于实验的阴性对照。同型对照选择与标记抗体同种属来源，同亚型，同荧光标记的抗体。比如：抗人的CD3的PE标记的抗体，小鼠的IgG2a。同型对照选择PE标记的小鼠的IgG2a。

看懂了流式抗体的选择方法，那么流式抗体使用注意事项也是实验中的关键问题，稍有不慎，实验就可能功亏一篑，每一步实验要领都是决定实验成功与否的关键，李工将注意事项一一列出：
1建议实验细胞的数量和抗体的比例要适当。细胞过量或抗体过量都可能使实验结果受影响，因此需要优化试验条件。注：不同的流式技术对抗体的需求量有较大差异，例如传统流式细胞术（采用鞘液流系统）需要1×106个细胞为起始上样量，抗体用量为10μl，而微流式细胞术则只需5×105个细胞，抗体用量减少到5μl。

2 直标的流式抗体应该4℃避光保存，不要冷冻。

3 尽量选择经实验验证的流式抗体，以保证实验结果。上海劲马系列流式抗体已经通过了实验验证，并且提供了相关数据图供用户参考。您还有任何不明白的问题咨询，我们将认真为您解答您实验中需求的每一个问题。上海劲马实验设备有限公司您身边的实验用品专家！