8 ng/L	5号标准品	150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
4 ng/L	4号标准品	150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
2 ng/L	3号标准品	150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
1 ng/L	2号标准品	150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
0.5 ng/L	1号标准品	150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

上海劲马实验设备有限公司是一家生物*企业，主要从事免疫学、分子生物学和常规生化试剂的研发、销售。并代理销售Omega、Sigma、R&D、GBD、ATCC、HYCLONE等二十多家国外品牌，致力于为广大高校、科研院所和企事业单位提供*的科研试剂和完善的技术服务，公司主营产品：ELISA试剂盒，免疫组化试剂盒，放免试剂盒，标准品，血清，抗体，培养基，细胞，生物试剂，实验耗材等。

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人白介素6ELISA试剂盒操作步骤

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