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1.标准品的制备:是非常复杂的问题,也是标记免疫分析中比较难于制备的一个成分。以下讨论的是实验室标准品(或商品化试剂中标准品)的制备。
1)基质的制备:如前所述,作为标准品的介质(基质)成分应与被测样品相同。对大多数用于测定血清中某物质的标准品,应用不含被测物质的零血清制备,以求反应的介质环境相当。但有时零值血清的制备十分困难,所以有些标准品用适当的缓冲液制备,并在缓冲液中加入一定量的载体蛋白(一般用1%~2%的牛血清白蛋白),以便使其与样品的介质环境相近。
零值血清的制备方法有:
(1)吸附法:血清中小分子物质如三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)等,可用活性炭吸附去除。这种方法简便,但待测物质难以清除干净,而且大分子活性物质不能用此法进行制备。
(2)反复冻融法:对大分子活性物质可选用低值血清,经反复冻融使被测物质失活。用这种方法可使某些蛋白类激素大部分失活,但也难以得到真正的零值血清。
(3)亲和层析法:用特异性抗体制备亲和层析柱,用以吸附被测抗原。用这种方法可以得到高质量的零值血清,但本法比较复杂而且成本也高。
2)标准物纯品的选择:应选择高化学纯和高免疫纯的纯品作标准品。其中免疫纯尤为重要,在标准品中不应含有与被测物质有交叉反应的物质。
3):先用零值血清配置高浓度的标准品,然后根据实验系统的要求,用零值血清将高值血清稀释至应有的浓度,制成符合预定要求的,由不同浓度组成的系列标准品。
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