考马斯亮蓝法测定蛋白质含量流程
该方法用于大多数蛋白质的定量是比较的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或*。去污剂的浓度超过0．2％影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。
1．Bradford浓染液的配制：将100rug考马斯亮蓝G-250溶于50m1 95％乙醇，加入100ml浓磷酸，然后，用蒸馏水补充至200ml，此染液放413至少6个月保持稳定。
2．标准曲线蛋白质样本的准备：尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例如测定抗体，可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的，也可用抗体作为标准蛋白。通常在20ug—150ug／100ul之间绘制标准曲线。
3．将待测样本溶于100~1缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同（用PBS）。
4．按1：5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去。
5．每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用5～30rain。染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。注意，显色反应不得超过30min．
6．根据标准曲线计算待测样本的浓度。
考马斯亮蓝和皮肤中蛋白质通过范德华力结合，反应快速，并且稳定，无法用普通试剂洗掉。待一两周左右，皮屑细胞自然衰老脱落即可无碍。
考马斯亮蓝R-250是电泳的
考马斯亮蓝G250和R250都可以染蛋白，一般用R250，G250染色后背景较深不易脱色。一般R250 染蛋白，G250 一般测蛋白浓度，也可染胶，敏感性更高但较慢脱色较难。
考马斯亮蓝G250常用的蛋白染料，作定性试验用,染色后为蓝绿色;R250较敏感,做定量实验用,染胶效果较好.染色后为红蓝色。
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