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小鼠转化生长因子β1(TGF-β1)elisa试剂盒说明书

时间:2012-6-19阅读:1128
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小鼠转化生长因子β1TGF-β1)酶联免疫分析
 
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:                                                           96T
3pg/ml-120pg/ml
使用目的:
本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中转化生长因子β 1TGF-β1)含量。实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠转化生长因子β 1TGF-β1)水平。用纯化的小鼠转化生长因子β 1TGF-β1)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入转化生长因子β 1TGF-β1),再与 HRP标记的转化生长因子β 1TGF-β1)抗体结合,形成抗体 -抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物 TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的转化生长因子β 1TGF-β1)呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度( OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠转化生长因子β 1TGF-β1)浓度。
试剂盒组成

 

1
30倍浓缩洗涤液
20ml×1
7
终止液
6ml×1
2
酶标试剂
6ml×1
8
标准品(240pg/ml
0.5ml×1
3
酶标包被板
12孔×8
9
标准品稀释液
1.5ml×1
4
样品稀释液
6ml×1
10
说明书
1
5
显色剂 A
6ml×1
11
封板膜
2
6
显色剂 B
6ml×1/
12
密封袋
1

 

标本要求
1           标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于 -20℃保存,但应避免反复冻融
2           NaN3的样品,因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的( HRP)活性。
 
操作步骤
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl(样品zui终稀释度为 5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置 37℃温育 3 0分钟。
4.配液:将 30倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30秒后弃去,如此重复 5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同 3
8.洗涤:操作同 5
9.显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀, 37℃避光显色15分钟.
10.终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.测定:以空白空调零, 450nm波长依序测量各孔的吸光度( OD值)。测定应在加终止液后 15分钟以内进行。

 

120pg/ml
5号标准品
150μl的原倍标准品加入 150μl标准品稀释液
60pg/ml
4号标准品
150μl5号标准品加入 150μl标准品稀释液
30pg/ml
3号标准品
150μl4号标准品加入 150μl标准品稀释液
15pg/ml
2号标准品
150μl3号标准品加入 150μl标准品稀释液
7.5pg/ml
1号标准品
150μl2号标准品加入 150μl标准品稀释液

OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在 5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD值大于标准品孔*孔的 OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数( n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准 .

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

保存条件及有效期

1.试剂盒保存:;2-8℃。

2.有效期: 6个月

上海劲马实验设备有限公司是国内外专业的ELISA试剂盒,进口ELISA试剂盒,国产ELISA试剂盒,ELISA试剂盒价格,ELISA试剂盒批发供应商,主营产品有:ELISA试剂盒,进口ELISA试剂盒,国产ELISA试剂盒,ELISA试剂盒价格,ELISA试剂盒批发等,上海劲马实验设备有限公司不仅具有国内外的技术水平,更有良好的售后服务和的解决方案,洽谈

操作程序总结:
计算
以标准物的浓度为横坐标, OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的

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